JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:03 د • October 30th, 2025
ابدأ بمزرعة Legionella pneumophila ، وهي بكتيريا مسببة للأمراض.
تمتلك هذه الخلايا البكتيرية نظام إفراز على غشاءها ، وهو أمر ضروري لعدوى المضيف.
الخلايا البكتيرية في ماء معقم لتحقيق الكثافة المطلوبة للتصوير المقطعي الإلكتروني المبرد (cryo-ET).
أضف جزيئات الذهب النانوية ، والتي تعمل كنقاط مرجعية لمحاذاة الصورة أثناء إعادة البناء ثلاثي الأبعاد.
خذ شبكة بها طبقة كربون مثقب لإيداع العينة البكتيرية.
ضع الشبكة داخل غرفة مملوءة بالغاز وقم بتطبيق تفريغ كهربائي لجعل السطح أكثر مقاومة للماء.
ضع المعلق على الشبكة ، مما يسمح للسائل بالانتشار بشكل موحد على السطح واستقرار الخلايا.
قم بإزالة الماء الزائد من الشبكة واغمرها في وسط تجميد سائل لتجميد العينة والحفاظ على بنيتها الخلوية.
العينة جاهزة الآن للتصوير بالتبريد لنظام الإفراز البكتيري.
لتحضير عينة التصوير المقطعي بالتبريد الإلكتروني ، قم بزراعة رقعة ثقيلة من Legionella Pneumophila على ألواح CYE-agar-streptomycin لمدة 48 ساعة عند 37 درجة مئوية.
أعد تعليق الخلايا في الماء إلى OD600 حوالي 0.7. ثم أضف خمسة ميكرولتر من جزيئات الذهب الغروية إلى 20 ميكرولتر من تعليق الخلية. توهج تفريغ شبكة كربون ثقب وماصة خمسة ميكرولتر من خليط الخلية عليها.
دعها تقف لمدة دقيقة واحدة. امسح الشبكة بورق الترشيح وقم بتجميدها في الإيثان السائل باستخدام جهاز مكبس مدفوع بالجاذبية.