زراعة بكتيريا الضمة الطبيعية سريعة النمو

خذ أنبوبا يحتوي على مزرعة Vibrio natriegens ، وهي بكتيريا سريعة النمو.

الطرد المركزي للثقافة لبيليه البكتيريا. تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على الوسائط المتبقية.

أعد تعليق الحبيبات البكتيرية في وسط جديد وانقلها إلى قارورة مخروطية تحتوي على نفس الوسائط لتحضير الثقافة البكتيرية.

احتضان المزرعة مع الاهتزاز في ظل ظروف التهوية.

نظرا لقصر وقت الجيل ، يستخدم Vibrio natriegens العناصر الغذائية وينقسم بسرعة لتوليد مجموعة بكتيرية مركزة.

باستخدام مقياس الطيف الضوئي ، راقب الكثافة الضوئية (OD) بانتظام لتحديد تركيز البكتيريا.

قم بتنمية المزرعة حتى يصل OD إلى واحد تقريبا ، مما يشير إلى مرحلة نمو أسية مع نشاط أيضي مرتفع.

نقل المزرعة إلى أنابيب الطرد المركزي.

جهاز طرد مركزي في درجة حرارة منخفضة لفصل البكتيريا مع الحفاظ على السلامة الخلوية.

ضع الأنبوب على الثلج وقم بإزالة المادة الطافية التي تحتوي على الحطام الخلوي.

قم بتخزين الحبيبات البكتيرية في درجة حرارة منخفضة للغاية لتحليلها النهائي.

للبدء ، اغسل مليلترا واحدا من ثقافة Vibrio natriegens طوال الليل عن طريق طردها بالطرد المركزي في جهاز طرد مركزي على الطاولة عند 10,600 مرة جم لمدة دقيقة واحدة.

استنشق المادة الطافية دون إزعاج الحبيبات ، وأعد تعليقه في مليلتر واحد من وسائط LB-V2 الطازجة. قم بتلقيح ملليلتر واحد من المزرعة المغسولة طوال الليل في لتر واحد من وسائط النمو الطازجة LB-V2 في قارورة Erlenmeyer محيرة سعة 4 لترات معقمة بغطاء معقم لتحقيق نسبة تخفيف من واحد إلى ألف نسبة. تنمو الثقافة عند 30 درجة مئوية أثناء الاهتزاز عند 225 دورة في الدقيقة.

استخدم مقياس الطيف الضوئي لمراقبة OD 600 للمزرعة ، وعندما تصل إلى 1.0 زائد أو ناقص 0.2 ، احصد المزرعة عن طريق طردها في أنبوبين سعة 500 مل عند 3,500 مرة جم لمدة 20 دقيقة عند أربع درجات مئوية ، ثم ضعها على الجليد. استنشق المادة الطافية وقم بمعالجة الحبيبات على الفور.