تحضير مستخلص الخلايا الخام من Vibrio natriegens

خذ معلقا من Vibrio natriegens ، الذي يحتوي على معدل تخليق بروتين مرتفع ، في مخزن مؤقت مبرد لمنع تدهور الخلايا.

جهاز طرد مركزي في ظل ظروف البرد.

تخلص من المادة الطافية لإزالة الملوثات.

أعد تعليق الحبيبات في حجم صغير من المخزن المؤقت المبرد.

باستخدام طرف عريض التجويف، انقل المعلق إلى أنبوب طرد مركزي دقيق لمنع القص الميكانيكي.

امزج التعليق وضع الأنبوب في حامل يوضع على الثلج.

اخفض طرف الصوتة في التعليق.

بدء الصوتنة لتعطيل غشاء الخلية وإطلاق المحتويات السيتوبلازمية.

جهاز طرد مركزي لفصل حطام الخلايا غير القابل للذوبان.

اجمع مستخلص المادة الطافية أو الخلية الخام التي تحتوي على محتويات السيتوبلازم في أنبوب جديد.

تجميد سريع مستخلص الخلية في النيتروجين السائل للحفاظ على نشاطه الحيوي.

يحفظ في درجات حرارة منخفضة للغاية لمزيد من الاستخدام في التعبير عن البروتين الخالي من الخلايا.

قم بتبريد المخزن المؤقت S30 للتحلل المحضر حديثا من 7.7 إلى أربع درجات مئوية تقريبا ، استخدم 10 ملليلترا من هذا المخزن المؤقت للتحلل S30 البارد لإعادة تعليق جميع الكريات الناتجة عن نفس الثقافة التي تبلغ حجمها لتر واحد ونقل التعليق إلى أنبوب سعة 50 مل. قم بالطرد المركزي لهذا التعليق عند 3,500 مرة جم لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية ، ثم استنشق المادة الطافية دون إزعاج الحبيبات وضعها على الجليد.

العمل في غرفة باردة ، أضف 500 ميكرولت