تعبير البروتين الخالي من الخلايا باستخدام مستخلص الخلايا الخام البكتيري

يستخدم نظام التعبير عن البروتين الخالي من الخلايا محللة الخلايا الخام البكتيرية ، والتي تحتوي على الآلية الجزيئية الضرورية للنسخ والترجمة في المختبر.

يتضمن هذا المحلل عوامل النسخ والريبوسومات والحمض النووي الريبي المنقول (tRNAs).

أضف مزيجا يحتوي على قالب الحمض النووي ، وبوليميراز الحمض النووي الريبي ، والنيوكليوتيدات ، والأحماض الأمينية إلى المحلل.

انقله إلى لوحة PCR وجهاز طرد مركزي لتجميع السائل الملتصق بالجدران. أغلق اللوحة لمنع التبخر.

احتضان في دورة حرارية عند درجة حرارة مثالية لدعم تعبير البروتين الخالي من الخلايا.

يرتبط عامل النسخ ببوليميراز الحمض النووي الريبي لتكوين مركب يرتبط بالحمض النووي للقالب.

يحفز هذا المركب تخليق الحمض النووي الريبي ، ويتضمن النيوكليوتيدات لتوليد الحمض النووي الريبي المرسال (mRNA).

يقوم mRNA بتجنيد الريبوسومات ، التي تبدأ الترجمة ، حيث تقوم الحمض النووي الريبي المرسال بتوصيل الأحماض الأمينية المقابلة لتشكيل سلسلة عديد الببتيد.

يتم طي عديد الببتيد إلى بروتين وظيفي ، جاهز للتطبيقات النهائية.

لإجراء تعبير البروتين الخالي من الخلايا باستخدام قالب الحمض النووي ، قم بإذابة المزيج الرئيسي لمحلول الطاقة 10X ، ومزيج الأحماض الأمينية الرئيسي 4X ، وقالب الحمض النووي في درجة حرارة الغرفة. ثم قم بإزالة مخزون T7 RNA polymerase و RNAse المثبط من الفريزر 20 درجة مئوية تحت ال