موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 4:37 دقيقة • October 30th, 2025
خذ ثقافة Phormidium lacuna ، وهي بكتيريا زرقاء خيطية.
قم بتجانس الثقافة لتفريق الخيوط ، ثم جهاز طرد مركزي لحبيبات البكتيريا.
تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في وسائط غنية بالمغذيات.
أضف الحمض النووي البلازميد الذي يحتوي على بروتين فلورسنت أخضر وجينات مقاومة للمضادات الحيوية على لوحة أجار مكملة بالمضادات الحيوية.
أضف المعلق البكتيري فوق الحمض النووي واحتضنه في ظل ظروف الإضاءة.
تستوعب البكتيريا الحمض النووي باستخدام النوع الرابع. تندمج الجينات التي تم إدخالها في إحدى النسخ المتعددة من الجينوم البكتيري.
أعد توزيع البكتيريا على لوحة أجار مكملة بالمضادات الحيوية لاختيار البكتيريا المحولة.
تحت المجهر الضوئي ، حدد الخيوط الخضراء السليمة التي تشير إلى التحول الناجح.
نقل الخيوط المختارة إلى وسائط سائلة ذات تركيز أعلى من المضادات الحيوية لإثراء السكان المحولين.
مرة أخرى ، ضعها على أجار بمستويات أعلى من المضادات الحيوية لفصل المحولات.
تصور تعبير GFP تحت مجهر مضان لتأكيد التحول الناجح.
ابدأ بتلقيح 50 مل من السائل F2 وسط في كل من قارورتين سعة 250 ملليلتر بمليلتر واحد من خيوط P. lacuna من ثقافة جارية. تزرع في الضوء الأبيض تحت التحريض لمدة خمسة أيام عند 25 درجة مئوية.
بعد خمسة أيام ، قم بتجانس 100 مل من تعليق الخلية P. lacuna عند 10,000 دورة في الدقيقة لمدة ثلاث دقائق وقياس الكثافة البصرية عند 750
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية