توليد طفرات تحمل علامة المضادات الحيوية في البكتيريا الزرقاء عن طريق إعادة التركيب المتماثل

ابدأ بثقافة البكتيريا الزرقاء.

قم بالطرد المركزي للثقافة ، ثم اغسل الحبيبات برفق للحفاظ على سطح البكتيريا.

جهاز طرد مركزي مرة أخرى ، أعد تعليق الحبيبات في وسط طازج ، وانقلها إلى أنبوب.

أدخل ناقلا غير متكاثر بجين مقاوم للمضادات الحيوية. يحيط بهذا الجين تسلسل الحمض النووي المتماثل للمناطق الموجودة في أعلى واتجاه مجرى الجين المستهدف في الجينوم البكتيري.

احتضان للسماح باستيعاب البلازميد بوساطة بيلي ، والذي يتماشى مع التسلسلات المتجانسة ويحل محل الجين المستهدف من خلال إعادة التركيب ، وبالتالي إدخال طفرة.

انشر الخلايا على أجار واحتضان ، مما يسمح لجين مقاومة المضادات الحيوية بالتعبير عن بروتين المقاومة.

تراكب سطح أجار مع أجار يحتوي على مضاد حيوي ، واحتضان. يعمل بروتين المقاومة في الخلايا الطافرة على تعطيل المضاد الحيوي ، مما يسهل بقائها على قيد الحياة وتكوين المستعمرة.

اختر المستعمرات الباقية وأعد الخطوط على أجار التي تحتوي على مضاد حيوي لفصل الطفرات المقاومة للمضادات الحيوية.

بعد تحضير الوسائط ، سلالات البكتيريا الزرقاء ، والبلازميدات ، وفقا لبروتوكول النص ، قم بإعداد ثقافة جديدة عن طريق تلقيح حلقة مليئة بالخلايا الزرقاء في 30 إلى 50 مل من وسط BG11.

قم بزراعة المزرعة في الضوء عند 30 درجة مئوية لمدة يومين إلى ثلاثة أيام ، إلى_{OD 750} يساوي 0.2 إلى 0.6.

بعد الحضانة ، قم بالطرد المركزي من واحد إلى مللي