تحضير صفيحة ميكروفلويدية تحتوي على خلايا بكتيرية

خذ على سبيل المثال صفيحة ميكروفلويدية تحتوي على أزواج من آبار الإدخال والخرج المتصلة بقنوات ميكروفلويدية، والتي تشمل قنوات السربنتين وقناة تجريبية.

لتحضير القنوات، أضف الوسائط إلى بئر الإخراج.

ضع اللوحة في مرحلة من الألواح وأغلقها بغطاء معقم.

قم بتفعيل تدفق الوسائط من بئر الإخراج إلى بئر الإدخال لتطهير أي جيوب هواء محبوسة داخل القنوات.

أزل الطبق. تخلص من الوسط المتبقي من بئر الإخراج وأضف مزرعة بكتيرية.

أضف إلى بئر الإدخال، وسائط جديدة لمنع ارتداد الهواء. أعد الطبق إلى المسرح.

أثناء الملاحظة تحت المجهر، استأنف التدفق لجذب الخلايا إلى القناة التجريبية.

قم بضبط معدل التدفق لتجنب دخول الخلايا إلى قنوات السربنتين لمنع الانسداد.

أوقف التدفق وحضن البكتيريا لتسهيل التصاق البكتيريا.

أزل الطبق وتخلص من بقايا الزراعة والوسط البكتيري.

البكتيريا داخل صفيحة الميكروفلويديك جاهزة الآن لمزيد من التجارب.

للبرايمر، أولا قم بإزالة لوحة الميكروفلويديك ذات 48 بئر من العبوة دون لمس سطح الزجاج في أسفل اللوحة، ونظف شريحة الزجاج في أسفل اللوحة باستخدام منديل عدسة. لتحضير قنوات الميكروفلويد، قم بإدخال ماصة 200 ميكرولتر بدرجة حرارة 37 درجة مئوية إلى بئر الإخراج، مع الحرص على تجنب الفقاعات. ثم ضع اللوحة على مرحلة اللوحة.

امسح الواجهة بالإيثانول، ثم أغلقها على مرحلة اللوحة بعد جفاف الإيثانول. في الوضع اليدوي على وحدة التحكم، اضبط السائل كمرق لوريا-بيرتاني عند 37 درجة مئوية، وأقصى قطر ليكون خمسة داين لكل سنتيمتر مربع. انقر على آبار الإخراج لتفعيل التدفق من المخرج إلى بئر الإدخال، لتمهيد القنوات.

بعد خمس دقائق، أوقف التدفق للتحضير للبذر، ثم أزل الطبق بعناية من المرحلة. ثم استنشق أي وسط متبقي من بئر الخرج دون إزالة أي وسط من الدائرة الداخلية المؤدية إلى قنوات الميكروفلويد. لزرع القنوات التجريبية، أضف 300 ميكرولتر من الوسط الأدنى إلى بئر الإدخال، ثم إضافة 300 ميكرولتر من الزراعة البكتيرية إلى بئر الإخراج.

أعد اللوحة إلى مرحلة التصوير مع التأكد من مسح الواجهة بالإيثانول قبل وضعها على اللوحة، واستخدم بث الكاميرا الحية للتركيز على قناة واحدة. أثناء مراقبة البث المباشر بصريا، استأنف التدفق عند 1 إلى 2 داين لكل سنتيمتر مربع لمدة تتراوح بين 2 إلى 4 ثوان، للسماح للخلايا بالدخول إلى القناة التجريبية وليس إلى قنوات السرفنتين، واترك اللوح على مرحلة التحكم في درجة الحرارة لمدة ساعة واحدة للسماح للخلايا بالارتباط. في نهاية فترة التوصيل، أزل اللوحة بعناية من المرحلة واسحب البكتيريا من الخرج دون الإزعاج في القناة.

ثم استخدم رأس ماصة جديد لإزالة الوسط من آبار الإدخال.