تحضير حبيبات النانوسيلولوز البكتيرية من البكتيريا المنتجة للسليلوز

خذ صفيحة صغيرة مملوءة بوسط غذائي يحتوي على المانيتول.

قم بتطعيم كل بئر ببكتيريا تنتج السليلوز وحضن في ظروف ثابتة.

خلال فترة الحضانة، تمتص البكتيريا المانيتول وتتحول إلى جلوكوز.

يتم نقل هذا الجلوكوز إلى مركبات إنزيم السليلوز المدمجة في الغشاء البكتيري ويبلمر إلى سلاسل غلوكان.

تخرج هذه السلاسل إلى الفضاء خارج الخلية، حيث تتبلور إلى ألياف دقيقة.

تتجمع الألياف الدقيقة في هياكل شريطة شكلها، مكونة مصفوفة نانوسليلوز ثلاثية الأبعاد.

كلما زاد إنتاج النانوسيلولوز، يتراكم عند واجهة الهواء والسائل، ويتكخف ليصبح حبيبات هلامية تشكل على شكل البئر.

اجمع الحبيبات وحضنها في محلول قلوي لتحليل الخلايا البكتيرية، ثم أزل الوسط المتبقي.

اشطف الحبيبات بالماء مرارا وتكرارا للتخلص من أي محلول قلوي متبق. تخزين الحبيبات في الماء لمنع الجفاف. ثم تعقم البخار لضمان التعقيم في التطبيقات المستقبلية.

انقل ملليترين من وسط الزراعة السائلة إلى كل بئر من صفيحة زراعة أنسجة بسعة 24 بئرا. خذ مستعمرتين مع إبرة تلقيح من أطباق البتري الملقحة بالتزامن مع الناس، وضعهما في البئر الأول من طبق زراعة الأنسجة. كرر نفس الإجراء مع الآبار ال 23 المتبقية.

حضن طبق زراعة الأنسجة عند درجة حرارة 30 درجة مئوية لمدة سبعة أيام. سينتج عن ذلك ما مجموعه 24 طبقة BNC بقطر 16 مم وسماكة تقارب 2 إلى 3 مم. اجمع حبيبات BNC من وسط النمو وتعقيمها في محلول هيدروكسيد الصوديوم بنسبة 200 ملليلتر لمدة ساعة على درجة حرارة 50 درجة مئوية لإزالة جميع آثار G. xylinus.

تخلص من المحلول، وأضف 200 ملليلتر من محلول هيدروكسيد الصوديوم الجاهز حديثا بنسبة 1٪. كرر نفس العملية مرة أخرى أو حتى تكتسب حبيبات BNC في المحلول مظهرا شفافا. اشطف حبيبات BNC بالماء ثلاث مرات، وخزنها في ماء عالي النقاء في درجة حرارة الغرفة.

تأكد من أن حبيبات BNC مغمورة بالكامل في الماء ولا تسمح لها بالتجفيف في أي وقت. ثم قم بتعقيم حبيبات BNC عند درجة حرارة 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.