عزل الأبواغ الداخلية من عينة بيئية عن طريق التحلل المستهدف للخلايا النباتية

خذ عينة بيئية تحتوي على خلايا نباتية وأبواغ داخلية لبكتيريا مكونة للأبواغ، إلى جانب بكتيريا أخرى.

تمتلك الأبواغ الداخلية طبقة واقية تساعدها على البقاء في الظروف الصعبة.

باستخدام وحدة ترشيح بالفراغ، يتم ترشيح العينة لحبس الخلايا والأبواغ الداخلية على غشاء.

ضع الغشاء في طبق وقطعه إلى قطع صغيرة.

انقل القطع إلى أنبوب، أضف حاجزا مؤقتا، وحرك الأنبوب لتحرير الخلايا والأبواغ الداخلية.

حضن بحركة على درجة حرارة عالية لإضعاف البنية الخلوية الخضرية دون الإضرار بالأبواغ الداخلية.

برد العينة، ثم أضف الليزوزيم وحضن القطعة مع التحريك. يقوم الليسوزيم باضطراب جدار الخلايا النباتية، مما يؤدي إلى تمزقها.

أضف هيدروكسيد الصوديوم ومنظف، وقم بالحضانة لتحلل الجزيئات الكبيرة والحطام الخلوي مع الحفاظ على الأبواغ الداخلية المرنة.

قم بترشيح العينة لعزل الأبواغ الداخلية. اغسل الأبواغ الداخلية لإزالة المواد الزائدة، وتجهيزها لمزيد من التحليل.

بمجرد تجهيز وحدة الترشيح ومضخة التفريغ وفقا لبروتوكول النص، استخدم ملقط معقم مشتعل بالإيثانول لإضافة غشاء نيتروسلولوز معقم إلى وحدة الترشيح. أضف نصف عينة الفائق التي تم تحضيرها للتو إلى وحدة ترشيح الغشاء واستخدم مضخة التفريغ لجمع الخلايا على الغشاء. عندما يمر السائل بالكامل عبر الفلتر، أوقف مضخة التفريغ.

استخدم ملقط معقم لإزالة الغشاء بعناية ووضعه في طبق بتري معقم. مع قطعة جديدة من ا