اختبار فوغز-بروسكاوير لتمييز الأنواع الحيوية للفيبريو كوليرا

خذ على الحين والآخر زراعة منفصلة من Vibrio cholerae، وهي بكتيريا ممرضة تحتوي على ثلاثة أنواع حيوية مختلفة: الكلاسيكي، النوع البري، والمتحور El Tor، وكل منها يمثل مجموعات فرعية مميزة جينيا.

يتم تلقيح كل مزرعة في أنابيب مملوءة بوسط متخصص لإجراء اختبار فوغز-بروسكوير (VP).

حضن البكتيريا مع الرج لتسهيل تكاثر البكتيريا.

الأنواع البرية من نوع إل تور تخمر الجلوكوز في الوسط وتنتج الأسيتوين، بينما الأنواع الحيوية الكلاسيكية والمتنوعة لا تفعل ذلك.

بعد ذلك، أضف α نفثول وهيدروكسيد البوتاسيوم إلى كل أنبوب، وامزجه جيدا، وحضن.

في وجود هيدروكسيد البوتاسيوم، يحفز الأكسجين الجوي أكسدة الأسيتوين إلى ثنائي الأسيتيل.

يتفاعل ثنائي الأسيتيل مع المركبات التي تحتوي على مجموعات الجوانيدين في الوسط ليشكل منتجا بلون وردي-أحمر، تزداد شدته بواسطة α-نفثول.

يشير تطور اللون إلى تفاعل إيجابي ل VP، وهو سمة مميزة للنمط الحيوي البري، بينما تظهر الأنماط الكلاسيكية والمتغيرة عدم تكوين اللون.

قم بتطعيم 4 ملليلتر من مرق ميثيل ريد فوجز-بروسكاور أو MR-VP عن طريق حقن 10 ميكرولتر من الزراعة الجاهزة مسبقا طوال الليل في 4 ملليتر من مرق MR-VP في أنبوب زراعة معقم وحضن التهوية في حاضنة شاكر بسرعة 225 دورة في الدقيقة لمدة 12-16 ساعة عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك، أضف 150 ميكرولتر من وزن 5٪ لكل حجم من ألفا-نفثول و50 ميكرولتر من هيدروكسيد البوتاسيوم 40٪ لكل حجم إلى 1 ملليلتر من مزرعة MR-VP الليلية في أنابيب الزراعة المعقمة على التوالي.

ثم، قم بتدوير الأنابيب لفترة وجيزة. اترك الأنابيب تبقى في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى أربع ساعات حتى يظهر تغير اللون.