تحضير عينات ميكسوكوكوس زانثوس للتصوير الخلوي الحي

ابدأ بزراعة من Myxococcus xanthus، وهي بكتيريا بطيئة النمو في التربة.

تلقيح مستعمرة في وسط مدعوم بمضاد حيوي.

تم تصميم الخلايا لمقاومة المضاد الحيوي، مما يضمن بقاء البكتيريا المطلوبة فقط.

انقل التعليق إلى قارورة أكبر تحتوي على الوسط وحضن التعليق مع الرج لتعزيز النمو الأمثل.

خذ غطاء غطاء مثبت على إطار معدني، يوفر الدعم الميكانيكي أثناء التصوير.

توزيع الثقافة البكتيرية عليه، ثم أضف كريات دقيقة فلورية لتكون نقاط مرجعية لمحاذاة الصورة مع التقاط صور متعددة.

ضع وسادة أجاروز مسخنة مسبقا تحتوي على الوسط، ثم ضع فوقها طبقة غطاء للحفاظ على الترطيب.

حضن الخلايا للسماح للخلايا بالالتصاق بقاعدة الأغاروز.

تزود الوسادة الخلايا بالعناصر الغذائية، مما يمكن من تصوير الخلايا الحية على المدى الطويل للعمليات الخلوية أثناء التكاثر في البكتيريا بطيئة النمو.

للبدء، أعد تعليق مستعمرة M. xanthus واحدة في 500 ميكرولتر من CTT بنسبة 1٪، مع مضادات حيوية، في أنبوب معقم وانقل التعليق بالكامل إلى قارورة إيرلينماير بسعة 50 ملليلتر تحتوي على خمسة ملليتر من CTT بنسبة 1٪. تحضير محلول مجهر 1٪ من الأغاروز يحتوي على 0.2٪ CTT عن طريق خلط جرام واحد من الأجاروز مع 80 ملليلتر من مخزن TPM و20 ملليتر من وسط CTT بنسبة 1٪. سخن المحلول في الميكروويف حتى يصبح الأغاروز منصهرا.

املأ طبق بترى بحوالي 60 ملليلتر من الأغاروز المنصهر واتركه يبرد حتى يصبح بدرجة حرارة الغرفة. سخن وسادة الأكارروز مسبقا على درجة حرارة 32 درجة مئوية لمدة لا تقل عن 15 دقيقة قبل الاستخدام. بعد ذلك، ضع غطاء زجاجي معقم على إطار بلاستيكي أو معدني به ثقب في المنتصف. ثم استخدم الشريط اللاصق لتثبيت انزلاق الغطاء على الإطار.

أضف من 10 إلى 20 ميكرولتر من خلايا M. xanthus النموة بشكل أسي على غطاء الدرجات. لإضافة كرات فلورية كعلامات ائتمانية للخلايا، استخدم مخزن TPM لتخفيف الكرات الدقيقة إلى 1:100. اهز تعليق الخرز جيدا وأضف من خمسة إلى عشرة ميكرولتر إلى الخلايا.

من الوسادة الكبيرة المسخنة مسبقا بحجم 1٪ من الأغاروز، اقطع وسادة صغيرة بحجم شريحة الغطاء وضعها فوق الخلايا. ثم ضع غطاء فوق الوسادة لمنع التبخر وللحفاظ على الخلايا في بيئة رطبة. حضن عينة المجهر عند درجة حرارة 32 درجة مئوية لمدة 15 إلى 20 دقيقة للسماح للخلايا بالالتصاق بقاع وسادة الأغاروز قبل تسجيل المجهر بتقنية التايم لابس.