تقييم الدور الوقائي للمركب المنشط بالحمض في الإشريكية القولونية تحت ضغط الحمض

خذ على سبيل المثال مزارع الإشريكية القولونية المؤتلفة الحساسة للإجهاد البيئي.

تحمل الثقافة التجريبية بلازميدا يشفر شابرون مفعل بالحمض، بينما تحمل الثقافة الضابطة فقط العمود الفقري للبلازميد.

قم بتلقيح مستعمرات واحدة في وسط مكملة بالمضادات الحيوية لضمان احتباس البلازميدات وحضانها لتعزيز نمو البكتيريا.

قم بتخفيف الثقافات في وسط جديد يحتوي على المضاد الحيوي ومحفز لتنشيط تعبير المرافقة.

قم بزيادة الثقافات إلى طور منتصف اللغاريتم، ثم تخفيفها لتحقيق كثافة بصرية محددة.

أضف الحمض لخفض الرقم الهيدروجيني، مما يسبب إجهاد الحمض.

في الزراعة التجريبية، تنشط الظروف الحمضية الشابرون، الذي يثبت البروتينات الخلوية ويمنع تجمعها. في الثقافة الضابطة، يؤدي غياب الشابرون إلى تدهور البروتينات الخلوية وتجمعها.

أضف قاعدة لتعادلها الرقم الهيدروجيني وإيقاف إجهاد الحمض.

راقب نمو البكتيريا بقياس الكثافة البصرية مع مرور الوقت.

يشير النمو المتزايد في ثقافة الاختبار إلى الدور الوقائي للمرافق أثناء الإجهاد الحمضي.

حضر مزرعة ليلية في 50 ملليلتر من LB مع الأمبيسيلين، وازرع الخلايا عند 200 دورة في الدقيقة و30 درجة مئوية. قم بتخفيف الزراعة العصبية بين الليلة 40 لتصبح 25 ملليتر من LB باستخدام الأمبيسيلين.

ننمو البكتيريا في وجود 0.5٪ أرابينوز عند 30 درجة مئوية و200 دورة في الدقيقة إلى كثافة بصرية عند 600 نانومتر، أو OD₆₀₀ يساوي 1.0، لتحفيز تعبير بروتين HDEB. لتجارب تحول الرقم الهيدروجيني، استخدم LB مع الأمبيسيلين والأرابينوز لتخفيف الخلايا إلى OD₆₀₀ وهو 0.5. قم بضبط قيم الرقم الهيدروجيني الخاصة بإضافة أحجام مناسبة من خمسة حمض هيدروكلوريك مولي.

بعد نقاط الزمنية المحددة، يتم تحييد الزرعات بإضافة الأحجام المناسبة من خمسة أضرار هيدروكسيد الصوديوم. راقب نمو الثقافات المعادلة والزراعة السائلة لمدة 12 ساعة عند درجة حرارة 30 درجة مئوية باستخدام قياسات القطر الزائد.