موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:14 دقيقة • November 28th, 2025
ابدأ بمستعمرات بكتيريا ممرضة تنمو على وسط أغار غني بالمغذيات.
اختر مستعمرة واحدة، مما يضمن وجود مجموعة متجانسة جينيا من الخلايا البكتيرية ويقلل من التنوع أثناء التصنيف الجيني.
باستخدام حلقة تلقيح معقمة، انقل المستعمرة المختارة إلى ماء فائق النقاء لتقليل خطر إدخال الملوثات إلى العينة.
يقوم بتدوير التعليق لتفكيك المستعمرة وتشتت الخلايا البكتيرية بشكل موحد.
بعد ذلك، سخن التعليق لتعطيل غلاف الخلية البكتيرية، والذي يتكون من الغشاء الخارجي، وطبقة البيبتيدوغليكان، والغشاء الداخلي.
هذا يؤدي إلى تحلل الخلايا البكتيرية وإفراز محتوياتها داخل الخلايا، بما في ذلك الحمض النووي الجيني، في الماء.
قم بطرد مركزي للتعليق بسرعة عالية لفصل الحطام الخلوي عن الحمض النووي الجيني.
انقل المادة الفائقة إلى أنبوب جديد لتطبيق التصنيف الجيني في مرحلة لاحقة.
للبدء، استخدم حلقات التلقيح المعقمة لزرع مزارع يرسينيا روكيري النقية على أي نوع أجار مناسب على أطباق بتر. حضن عند 22 درجة مئوية لمدة يوم إلى يومين أو 15 درجة مئوية لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام. بعد ذلك، باستخدام حلقات اللقاح، اختر مستعمرة تمثيلية واحدة من كل طبق بتري وانقل إلى أنابيب طرد مركزي بسعة 1.5 مليليتر، تحتوي على 50 ميكرولتر من الماء فائق التنقية لإعادة تعليقها.
دوامة لفترة وجيزة واحتضن لمدة سبع دقائق على كتلة تسخين عند درجة حرارة 100 درجة مئوية. ثم قم بجهاز الطرد المركزي بوزن 16,000 جرام لمدة ثلاث دقائق واستخدام الماصة لنقل الحمض النووي التابع للأنبوب الفائق بعناية إلى أنابيب طرد مركزي فارغة بسعة 1.5 مليليتر. انتقل إلى الخطوة التالية أو خزن الحمض النووي عند ناقص 20 درجة مئوية.