تعريض مجتمع بكتيريا فموية صناعي لمراحل هضم محاكاة

ابدأ بأنبوب يحتوي على مجتمع بكتيريا صناعي شائع في فم الإنسان.

أضف سائل لعاب محاكى يحتوي على الميوسين، وهو بروتين جليكو، وإنزيم α-أميلاز لمحاكاة بيئة الفم، ثم حضن المحلول مع الرج.

تتفاعل البكتيريا مع المخاط، الذي يعزز التجمع، بينما يكرر α-الأميلاز الظروف الإنزيمية للعاب.

اجمع عينة.

بعد ذلك، قدم سائل معدي محاكى يحتوي على الموسين عند درجة حموضة حمضية لمحاكاة بيئة المعدة، وحضنه مع الرج.

الظروف الحمضية تقتل الأنواع البكتيرية الحساسة للأحماض، لكن الأنواع البكتيرية المقاومة للأحماض والمغطاة بالمخاط وتحمل الحموضة بشكل طفيف تبقى.

اجمع عينة أخرى.

وأخيرا، أضف سائل معوي محاكى يحتوي على البيكربونات والأملاح الفسيولوجية. حضن مع الرج.

البيئة الغنية بالملح تسبب إجهادا أيونيا، مما يعطل الغشاء البكتيري ويقلل من قابلية البقاء.

اجمع عينة نهائية.

جميع العينات الثلاث بعد المحاكاة جاهزة الآن لتقييم صلاحية البكتيريا.

لمحاكاة الهضم الفموي، انقل 3 ملليلتر من مجتمع البكتيريا في أنبوب معقم بسعة 50 ملليتر، وامزجه مع 3 ملليتر من سائل اللعاب المحاكى أو SSF.

أضف 75 وحدة لكل ملليلتر من ألفا-أميلاز من لعاب الإنسان من النوع 9A وجرامين لكل لتر من الموسين من معدة الخنزير النوع 2. حضن الخليط على درجة حرارة 37 درجة مئوية و100 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين. اجمع عينة بحجم 2 ملليلتر لاستخراج الحمض النووي وقياس كمية تدفق السيلتومترية.

لمحاكاة الهضم المعدي، أضف 4 ملليلتر من سائل المعدة المحاكى أو SGF إلى 3 ملليتر من البكتيريا. استخدم ضرس واحد HCl لضبط الرقم الهيدروجيني إلى 3 إذا لزم الأمر. حضن العينة عند 37 درجة مئوية و100 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين.

ثم اجمع عينة بحجم 2 ملليتر. للهضم بالأمعاء الدقيقة، أضف 4 ملليلتر من سائل الأمعاء المحاكى أو SIF إلى البكتيريا. استخدم هيدروكسيد الصوديوم لضبط الرقم الهيدروجيني إذا لزم الأمر.

ثم حضن العينة على درجة حرارة 37 درجة مئوية و100 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين، وجمع عينة بحجم 2 ملليتر.