موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:17 دقيقة • November 28th, 2025
ابدأ بحجر آجار ناعم منصهر في درجة حرارة دافئة.
قم بتطعيم مزرعة Pseudomonas syringae ، السلالة الاختبارية، في الأجار.
ثم تدور دوامة لفترة وجيزة لتوزيع الخلايا بشكل متساو.
اسكب الخليط على طبق أجار متصلب ووزعه بشكل متساو.
أغلق الغطاء ودعه يتصلب.
لاحظ وجود مادة فائقة مفلترة على سطح الأجار المتصلب.
يحتوي الفائق على بكتيريوسين، وهو جزيء مضاد للبكتيريا، مشتق من سلالة P. syringae المعطية الناتجة عن الإجهاد.
حضن الصفيحة للسماح بنمو البكتيريا وانتشار الباكتيريوسين عبر الأجار.
يرتبط الباكتيريوسين بمستقبلات سطحية محددة في السلالة المختبرة ويعطل غشاءها، مما يؤدي إلى موت الخلية.
ينتج عن ذلك تكوين منطقة واضحة على الأجار، تشير إلى المنطقة التي قتل فيها السلالة المختبرة بواسطة جزيء البكتيريوسين المضاد للبكتيريا.
قم بتخفيف الثقافة من 1 إلى 100 إلى قاعدة بيانات جديدة. حضن الزراعة لمدة ثلاث إلى أربع ساعات مع هز الغرفة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، حضر أجار مائي معقم عن طريق تعقيم تعليق الأجار في مياه فائقة النقي.
حافظ على الأجار الطري المنصهر في حمام ماء بدرجة 60 درجة مئوية قبل الاستخدام. باستخدام ماصة مصلية معقمة، انقل ثلاثة ملليلتر من الأجار الطري إلى أنبوب زراعة معقم. أعد أنبوب الزراعة إلى حمام الماء للحفاظ عليه في حالة منصهرة.
قبل صب الطبقة العليا، دع الأجار المنصهر يبرد، لكن لا تدعه يتصلب.
من الضروري الحفاظ على الأجار في حالة ساخنة ومنصهرة بالكامل قبل التطعيم. وإن لم يكن كذلك، فإن الطبقة ستكون ذات مظهر حبيبي وسيكون من الصعب تفسيرها.
في غطاء معقم، قم بتلقيح 100 ميكرولتر من ثقافة الاختبار في الأجار الطري والدوامة للخلط. قم بتدوير الثقافة يدويا لمدة 10 إلى 15 ثانية، ثم صبها في أسفل طبق الأجار. قم بإمالة اللوحة في جميع الاتجاهات لضمان تغطية الأجار الناعمة للأجار السفلي بشكل متساو.
غط الطبق واتركه 20 إلى 30 دقيقة ليتصلب. كن حذرا من عدم إزعاج اللوح أثناء التصلب. بعد أن يتصلب، ضع من اثنين إلى خمسة ميكرولتر من المادة الفائقة على طبقة الغطاء.
دع الأطباق تحتضن طوال الليل في درجة حرارة الغرفة. راقب وسجل النتائج في صباح اليوم التالي. باستخدام هذه الطريقة، يتم تثبيط سلالين من P. syringae بواسطة بكتيريوسينات مختلفة. السلالة A حساسة لباكتيريوسين عالي الوزن الجزيئي، تايلوسين، لكنها ليست حساسة لبكتيريوسين بديل منخفض الوزن الجزيئي.