عزل البكتيريا المتكيفة مع الإجهاد من خلال اختيار مستعمرة واحدة

خذ مزرعة بكتيرية تم زراعتها تحت ظروف ضغط لفترة طويلة.

يؤدي الإجهاد طويل الأمد إلى طفرات عفوية، والانتقاء الطبيعي، وتكاثر البكتيريا المتكيفة مع الإجهاد.

لعزل هذه البكتيريا، قم بتغليف حجم صغير من الزراعة على صفيحة أجار تحتوي على نفس المجهد وحضنها.

يضمن المسبب نمو مستعمرات بكتيرية متكيفة فقط مع الإجهاد.

اختر مستعمرة واحدة للحفاظ على نقاء الوراثة وتلقيح الوسط السائل بعامل الضغط.

حضن البكتيريا مع الرج لتسهيل نمو البكتيريا المتكيفة مع الإجهاد.

استخدم كمية صغيرة من الثقافة لتحصين الوسائط الطازجة بعامل التوتر.

وفي الوقت نفسه، قم بتطعيم وسط آخر يحتوي على المسبب ببكتيريا برية أو غير متكيفة مع الإجهاد.

قس الامتصاص على فترات منتظمة كمؤشر على نمو البكتيريا.

قارن ملف النمو لضمان عزل ناجح للبكتيريا المتكيفة مع التوتر.

جهز وسط صفيحة أجار بنسبة 1.6٪ يحتوي على نفس عامل الإجهاد وبنفس تركيز الوسط. ضع طبق 0.1 ملليلتر من مزرعة المخرج من الكيموستات واحتضنه عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة. بعد الحضانة، انزع مستعمرات واحدة من الطبق باستخدام عود أسنان معقم وقم بتطعينها في أنابيب اختبار بسعة 15 ملليلتر تحتوي على نفس المجهد وبنفس التركيز المتوسط كما في الكيموستات.

احتضن لمدة ست ساعات. انقل ملليتر واحد من مرق الزراعة إلى قارورة إرلنماير بسعة 250 ملليتر تحتوي على 50 ملليتر من الوسط. احصد 0.5 ملليلتر من مرق الزراعة كل ساعة وقس الكثافة البصرية عند 600 نانومتر.

قارن معدل نمو السلالة المتكيفة مع معدل السلالة البرية بناء على المسبب الضغطي