موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:07 دقيقة • November 28th, 2025
ابدأ بعينة من مياه البحر تحتوي على مجتمعات ميكروبية متنوعة، بما في ذلك بكتيريا قادرة على تحلل الهيدروكربونات.
قم بتخفيفات تسلسلية للعينة في محلول ملحي لتقليل كثافة الميكروبات.
أضف النفط الخام إلى الماء المقطر المعقم وحرك الخليط لإذابة جزئيا مكونات الهيدروكربونات في الزيت.
اترك الخليط يستقر، مفصولا إلى أجزاء زيتية قابلة للذوبان في الماء وغير قابلة للذوبان في الماء.
جهز ألواح أجار انتقائية باستخدام كل جزء من الزيت كمصدر كربون وحيد لإثراء البكتيريا التي تحلل الهيدروكربونات القابلة للذوبان أو الكارهة للماء.
ضع عينات مياه البحر المخففة على وسط انتقائي وحضنتها عند درجة الحرارة المحيطة.
تعتمد المستعمرات التي تظهر على إنزيمات مثل الهيدروكسيلاز والديوكسينازات لأقلاب الهيدروكربونات.
اختر مستعمرات مميزة شكليا وضعها على وسط جديد يحتوي على نفس نسبة الزيت للحصول على مزارع نقية من البكتيريا المتحللة للهيدروكربونات.
تمكن هذه الطريقة من العزل الانتقائي للبكتيريا البحرية المتحللة للزيت.
لتحضير وسط بسيط يحتوي على جزء قابل للذوبان من الزيت والماء وجزء غير قابل للذوبان من الزيت والماء كمصدر كربون وحيد، أضف 1-2٪ من النفط الخام إلى 500 ملليلتر من الماء المقطر المعقم في قارورة فلتر تحتوي على صمام في الأسفل. حافظ على القارورة تحت تحريك مستمر عند 24 إلى 28 درجة مئوية عند 150 ضعف الغرام لمدة 48 ساعة. بعد ذلك، ضع القارورة على سطح مستقر وانتظر من 10 إلى 20 دقيقة للسماح للجزء القابل للذوبان وغير القابل للذوبان بالانفصال.
ثم افتح قارورة الفلتر السفلية لنقل الجزء القابل للذوبان من الزيت والماء إلى قارورة معقمة جديدة مع الحفاظ على الجزء غير القابل للذوبان من الزيت والماء. ثم حضر زجاجتين من بوشنيل هاس أجار بحد أدنى متوسط. استخدم جهاز الأوتوكلاف.
اجمع بين النسبة القابلة للذوبان في الزيت والماء كمصدر كربون وحيد لإنتاج 500 ملليلتر من وسط الأجار. افعل الشيء نفسه مع الجزء غير القابل للذوبان من الزيت والماء وانقل حوالي 25 ملليلتر من كل وسط إلى أطباق بتري الفردية. لعزل البكتيريا التي تحلل الزيت، أعد استخدام عينات مخففة سابقا واستخدم 100 ميكرولتر من كل مخفف على أطباق بتيري التي تحتوي على وسط أجار وطبقها.
تذكر أن تحافظ على ضوابط سلبية على لوحاتك. حضن الأطباق لمدة يوم إلى ثلاثة أيام عند درجة الحرارة المستهدفة وكرر إجراءات العزل كما في السابق.