موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:35 دقيقة • November 28th, 2025
ابدأ بلوحة زراعة تحتوي على بكتيريا مدمجة تحت وسادة جل الأغاروز لتثبيت البكتيريا ودعم نمو الطبقة الأحادية.
تعبر البكتيريا بشكل أساسي عن البروتين الفلوري الأخضر، مما يتيح مراقبة تعبير الجينات في الوقت الفعلي.
صب جل أغاروز إضافي حول الوسادة لإغلاق العينة وتركها تتصلب في درجة حرارة الغرفة.
أغلق اللوح بشريط لاصق، ثم ثقبها للسماح بتبادل الغاز، ثم قلبها لمنع التكثف.
حضن اللوح على درجة حرارة منخفضة لتثبيت الهلام ومنع انقسام البكتيريا.
بعد ذلك، ضع زيت الغمر على الهدف وضع اللوح على مرحلة المجهر الكونفوكلي.
ابدأ تصوير الزمن.
مع نضوج GFP تدريجيا، يبدأ في التوهج. أثناء انقسام الخلية، توزع هذه البروتينات الفلورية بين الخلايا الابنة، مما يسبب انخفاضا في شدة التألق.
هذا يخلق نمط فلورة ذو أسنان منشارة، وتظهر الفروقات في هذا النمط بين الخلايا المتطابقة جينيا في نفس البيئة ضوضاء بيولوجية في التعبير الجيني.
لتصوير العينات، أزل القارورة من الماء ودع محلول الجل يبرد إلى درجة حرارة الجسم. صب ثلاثة مليمترات من الجل على محيط لوحة العينة. عندما يتصلب الأغاروز، أغلق اللوح بشريط لاصق واستخدم إبرة قياس 25 لثقب عدة فتحات في الشريط.
ثم ضع الصفيحة مقلوبة على درجة حرارة أربع درجات مئوية لمدة لا تقل عن 30 دقيقة للسماح للأجاروز بالتصلب الكامل، مع منع انقسام الخلية. خلال 24 ساعة، استخدم مجهر فلوري كونفوكلي لتحديد العينة بأقل تكبير وتفعيل نظام التركيز التلقائي للمجهر. ضع الزيت على الهدف المناسب واستخدم وحدة تحكم المنصة لتحريك اللوحة لتوزيع الزيت بعناية.
ثم شغل التركيز التلقائي مرة أخرى واتبع الاقتراح الافتراضي لمقطع الخطوط العرضية بخطوة Z لتصوير العينة.