JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:51 د • November 28th, 2025
خذ على سبيل المثال مزرعة بكتيريا معدلة وراثيا تم تعديلها لتحتوي على بلازميد يعبر عن بروتين فلوري إفرازي ويمنح مقاومة للمضادات الحيوية.
قم بتطعينه في وسط يحتوي على المضاد الحيوي وحضنه بحركة الرج لتعزيز نمو البكتيريا.
يضمن المضاد الحيوي أن الخلايا التي تحتفظ بالبلازميد فقط هي التي يمكن أن تتكاثر.
بمجرد وصول الزراعة إلى الكثافة المطلوبة، انقلها إلى نظام مناولة سوائل آلي.
تحتوي صفيحة البئر العميق على تركيزات متفاوتة من العناصر الغذائية الأساسية، والتي تصرف في صفيحة ميكروتيتر لإنشاء تركيبات وسائط مميزة.
قم بتلقيح كل بئر في اللوحة بمزرعة البكتيريا.
أغلق الصفيحة وضعها في مفاعل حيوي دقيق، يحافظ على درجة حرارة وتهوية متساوية.
تؤدي التركيبات المختلفة إلى اختلافات في نمو البكتيريا وإفراز البروتين الفلوري.
يقيس حساس بصري في الجهاز كثافة الخلايا والفلورة، مما يتيح مقارنة نمو البكتيريا وإنتاج البروتينات الفلورية عبر تركيبات الوسط.
تعقيم ألواح البئر العميقة لتخزين المحاليل على طاولة العمل عن طريق مسح الألواح بنسبة 70 بالمئة الإيثانول ثم تجفيفها في غطاء تدفق طبقي. ابدأ زراعة البذور بتطعيم 50 ملليتر من وسط BHI يحتوي على 25 ملليغرام لكل لتر من الكانامايسين باستخدام أليكوت واحد من بنك الخلايا العامل. ضع جميع أدوات المختبر اللازمة على طاولة العمل الروبوتية واصب الحلول المخابرية في الأداة المقابلة لها.
ثم نبدأ سير العمل الآلي لتحضير الوسائط حتى يتم الوصول إلى الخطوة الأخيرة، وهي التطعيم، في الوقت المناسب لبدء زراعة البذور. أخذ عينات من زراعة البذور بعد حوالي ساعتين لمراقبة النمو بقياس الكثافة البصرية عند 600 نانومتر أوOD 600. استمر في مراقبة النمو في كل ساعة.
بعد حوالي خمس ساعات، تصل الزراعة إلى جرعةجرعة زائدة 600 بين ثلاث وأربع ساعات، وتستخدم لتطعيم الثقافات الرئيسية. ضع زراعة البذور على طاولة عمل معالجة السوائل واستمر في بروتوكول تحضير الوسائط. أغلق صفائح الميكروتيتر الزراعية بعد التطعيم.
بعد ذلك، ضع جهاز MTP المغلق للزراعة في جهاز Biolector. ثم ابدأ بروتوكول الزراعة المحدد مسبقا.