JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:35 د • November 28th, 2025
ابدأ بتلقيح حلقة من سلالة بكتيريا زرقاء على وسط نمو. حضن الخلايا للسماح للخلايا بالنمو إلى الكثافة المطلوبة.
غسل الخلايا بالطرد المركزي وتخلص من المادة الفائقة التي تحتوي على المستقلبات والحطام المتبقي.
أعد تعليق الحبيبة في حجم صغير من وسط النمو لتكوين تعليق مركز.
امزج كمية من هذا التعليق مع الجلسرول، وهو واقي تجميد يثبت الغشاء ويمنع تكوين بلورات الجليد أثناء التجميد.
إلى مثال آخر، أضف ثنائي ميثيل سلفوكسيد التجميد، وهو واقي تجميد يخترق الخلايا ويثبط تكوين نوى الجليد.
تخزين العينات في درجات حرارة منخفضة، حيث يتوقف النشاط الأيضي وتبقى الخلايا قادرة على الحياة لفترات طويلة.
للحياة، قم بكشط كمية صغيرة من الكتلة الحيوية المجمدة على طبق أجار بدون مضادات حيوية وخط لتقليل التوتر ودعم التعافي التدريجي.
تمكن هذه الطريقة من الحفظ بالتبريد وإحياء سلالات البكتيريا الزرقاء على المدى الطويل للدراسات المستقبلية.
لتخزين السلالات على المدى الطويل، قم بإعداد زراعة جديدة للسلالة عن طريق تطعيم حلقة مليئة بالخلايا في 30 إلى 50 ملليلتر من وسط BG11. ازرع الزراعة لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام ليصل إلى OD750 يساوي 0.4 إلى 0.7.
بعد استخدام BG11 لغسل الخلايا مرة واحدة، أعد تعليق الحبيبات في حوالي ملليلتر من BG11. أضف 0.8 ملليلتر من الخلايا المركزة إلى أنبوب واحد. ثم أضف 0.2 ملليلتر من الجلسرول المعقم بفلتر 80٪.
أضف إلى أنبوب آخر 0.93 ملليلتر من الخلايا المركزة و0.07 ملليلتر من DMSO. خزن كلا الأنبوبين عند درجة حرارة سالبة 80 درجة مئوية. لإحياء السلالات، أزل الأنبوب واستخدم عود أسنان عريض الطرف لكشط بعض الخلايا على صفيحة أجار بدون مضادات حيوية. ثم استخدم حلقة معقمة لتخرج بشكل طبيعي.