نمذجة البلعمة المملة باستخدام خلايا الدم الحمراء المظلمة في المختبر

خذ خلايا دم الأغنام الحمراء المحمولة ب IgM أوبسون (SRBCs) التي تحتوي على أجسام مضادة IgM مرتبطة بمستضدات سطح الخلية.

أضف مصل يحتوي على بروتينات مكملة باستثناء C5.

يرتبط مركب C1 بالأجسام المضادة ويصبح نشطا.

يشق C1 المنشط C4 وC2، مكولا C3 تحويل، الذي يشق C3 ويرسبهم C3b على SRBCs.

بدون C5، يتدهور C3b إلى C3bi.

أضف خلايا الدماغ السريعة إلى مزرعة البلاعمية.

يرتبط C3BI بمستقبل البلعم، مما يؤدي إلى بلعمة SRBC.

أضف محلول منخفض التوتر لتحليل وإزالة الخلايا البلورية غير المستوعبة.

أضف محلول التحلل لتحليل الخلايا وإطلاق الهيموغلوبين SRBC.

قدم مادة كاشفة.

في وجود اليوريا، يحفز الهيموغلوبين أكسدة الديامينوفلورين بواسطة بيروكسيد الهيدروجين، مما ينتج منتجا ملونا.

قس امتصاص المنتج الملون، والذي يتناسب مع البلعمة التي يتم تحويلها إلى SRBC.

يمثل هذا الاختبار البلعمة للبكتيريا الموسومة بالأجسام المضادة باستخدام خلايا SRBC المصابة لمحاكاة الأهداف البكتيرية.

لإجراء اختبار أوبسونيزشن، حضن 2 في 10 إلى ثمن خلايا الدم الحمراء أو SRBC مع 50 ميكرولتر من الغلوبولين المناعي M أو IgM المضاد لSRBC للأرنب لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

ثم حضن خلايا الدم البيضاء المصابة ب 50 ميكرولتر من المصل البشري الناقص ل C5 لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لتثبيت شظايا مكمل مثبطي C3b وC3b على الخلايا المغلفة ب IgM.

بعد ذلك، استنشق الوسط وأضف 100 ميكرولتر من 1 في 10 إلى سبعة أقراص SRBC الموزعة لكل ملليلتر من الوسط إلى كل بئر من صفيحة تحتوي على 1 في 10 إلى رابع بلاعم فأر مزروعة ليليا لكل بئر.

حضن زراعة البلاعم الجريئة-الجرعة السريعة للفأر لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية ثم إزالة الخلايا البلاعمية غير المرتبطة بغسل 100 ميكرولتر من محلول تحلل كلوريد الأمونيوم-البوتاسيوم لمدة دقيقة واحدة.

بعد إزالة القطع الصلبة المنفصلة، اشطف ب 100 ميكرولتر من الوسط. قم بتحليل الخلايا المتبقية بنسبة 0.1٪ من كبريتات الصوديوم الدوديسيل وعالج الليزات ب 50 ميكرولتر من 2,7-ديامينوفلورين مع 3٪ بيروكسيد الهيدروجين و6 أضرار يوريا.

ثم قس امتصاص تكوين الفلورين الأزرق المحفز بالهيموغلوبين على مقياس طيف ضوئي عند 620 نانومتر.

استخدم منحنى قياسي عند قيم امتصاص 620 نانومتر مع عدد معروف من SRBCs لتحديد عدد SRBCs المزيفة التي تم بلعمها بالخلايا البحرية.