موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:51 دقيقة • February 2nd, 2026
ابدأ بصفيحة متعددة الآبار تحتوي على خرزات معقمة وحاجز في كل بئر.
أضف دودة C . elegans إلى كل بئر لعزل مجتمعها البكتيري.
باستخدام متجانس، يتم تعطيل الديدان الميكانيكية لإطلاق البكتيريا في المخزن الخلفي.
جهاز طرد مركزي لفصل حطام الخلايا وجمع المادة الفائقة التي تحتوي على البكتيريا.
قم بتغليف المحلول البكتيري المخفف على ألواح أغار من العناصر الغذائية الانتقائية بتركيبات مختلفة لدعم نمو أنواع البكتيريا المتنوعة.
حضن الصفائح للسماح للبكتيريا بالتكاثر وتكوين مستعمرات مرئية.
باستخدام حلقة معقمة، اختر مستعمرة واحدة معزولة ووضعها على طبق جديد من نفس الوسط.
حضن الصفائح للسماح بنمو مستعمرات بكتيرية نقية.
قم بتطعيم كل مستعمرة نقية في الوسط السائل المناسب وحضنها.
تنمو هذه البكتيريا لتصبح مزارع نقية، كل منها يمثل نوعا بكتيريا مرتبطا طبيعيا ب C. elegans.
لعزل البكتيريا، حضر صفيحة بسعة 96 بئر تحتوي على حوالي ثلاث حبات معقمة بقطر 1 ملم، و20 ميكرولتر من محلول M9 لكل بئر، واستخدم ماصة واحدة من الديدان الخيطية المغسولة لكل بئر بأقل قدر ممكن من السائل. قم بتكسير الدودة الخيطية كما هو موضح قبل استخدام موحش الخرز، ثم قم بعملية طرد مركزي قصير للصفيحة لنقل السائل إلى القاع. بعد الانتهاء، اجمع التعليق وقم بتخفيفه تدريجيا بنسبة واحد إلى عشرة.
ضع حتى 100 ميكرولتر من نظام التعليق المخفف على ألواح أجار بقطر 9 سنتيمترات. ثم حضن الصحون عند 15 إلى 20 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة. للحصول على الزراعة البكتيرية النقية، اختر مستعمرة واحدة من الصفيحة الحاضنة باستخدام حلقة معقمة أو عود أسنان ووضعها على صفيحة أجار جديدة تحتوي على نفس وسط الأجار المستخدم أثناء التنقية. تأكد من استخدام ثلث اللوحة فقط.
ثم تعقم حلقة قابلة لإعادة الاستخدام أو استخدم حلقة معقمة جديدة واسحبها عبر الشريط الأول لإنشاء شريط ثان على ثلث جزء آخر من لوحة العينة. كرر ذلك بسحب حلقة عبر السلسلة الثانية وإنشاء السلسلة الثالثة لتحقيق نمو المستعمرة الواحدة.
حضن اللوح تحت نفس ظروف النمو المستخدمة للعزل، وإذا لزم الأمر، كرر خطوة التنقية. ازرع المستعمرات النقية في وسط سائل باستخدام نفس درجة الحرارة وظروف النمو.