عزل خلايا ظهارية مثانة الفأر التي تحتوي على مجتمعات بكتيرية داخل الخلية

ابدأ بخلايا ظهارية المثانة المأخوذة من مثانة فأر مصابة بالإشريكية القولونية الممرضة الفلورية الموسومة بالتهاب المسالك البولية.

أثناء العدوى، تغزو هذه البكتيريا الخلايا الطهارية وتشكل مجتمعات بكتيرية داخل الخلية، أو IBCs—وهي هياكل شبيهة بالأغشية الحيوية تحميها من دفاعات المناعة المضيفة.

تحت المجهر التشريحي، حدد خلايا IBC كتجمعات فلورية كبيرة محصورة داخل الخلايا الطهارية الفردية.

تجميع نظام الميكروبايتينج الفموي باستخدام شعيرات زجاجية مسحوبة متصلة بماصة استنشاق لعزل خلايا الظهارة المفردة التي تحتوي على مخلوق الالتهاب الالتهابي.

اغمس الطرف الشعري لفترة وجيزة في PBS لتقليل امتصاص السوائل المدفوعة بالشعيرات الدموية.

ضع الشعيرة الدموية بالقرب من الخلية الظهارية الفلورية المختارة وطبق شفطا لطيفا لجذب خلية واحدة تحتوي على IBC، متجنبا الخلايا غير المصابة والبكتيريا خارج الخلية.

طرد الخلية إلى أنبوب طرد مركزي دقيق معقم باستخدام ضغط إيجابي طفيف، مما يحافظ على قدرة البكتيريا على البقاء.

تمكن هذه الطريقة من عزل الخلايا الطهارية التي تحتوي على خلايا التهابية لتحليل الخلايا الواحدة.

عندما يتم كشط جميع الخلايا، أدخل الطرف غير المسحوب من الشعيرات الدموية الزجاجية المسحوبة في سدادة مطاطية لأنبوب شفط وثبت الطرف الضيق من طرف ماصة بسعة 1 ملليلتر بإحكام في الطرف الآخر المفتوح للأنبوب.

ثبت الطرف الضيق من ماصة است