موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 4:02 دقيقة • February 2nd, 2026
خذ إجمالي الحمض النووي الريبي المستخرج من دماغ فأر ملوث ببكتيريا ممرضة. يحتوي المستخلص على نصوص من جينات مستجابة للعدوى.
أضف إنزيما يحلل الحمض النووي ويحتضن لتحليل الحمض النووي الجيني المتبقي.
أضف خلطة رئيسية تحتوي على إنزيم الإنزيم العكسي (RT)، والنوكليوتيدات، والبادئات غير المحددة.
الحضانة لتخليق الحمض النووي المكمل (cDNA).
أدخل درجة حرارة عالية لتعطيل إنزيم RT.
خذ على سبيل المثال مزيج رئيسي يحتوي على بوليميراز DNA، ونيوكليوتيدات، وصبغة مزدوجة السلسلة مرتبطة بالحمض النووي، وبادئات خاصة بالجين المستهدف.
أضف cDNA وطبق الحرارة لتغيير طبيعة الحمض النووي.
يرتبط البرايمر ب cDNA المستهدف، مما يمكن من تخليق خيوط DNA جديدة.
تتكرر الدورة لتضخيم الجين المستهدف.
يرتبط الصبغة بالحمض النووي المضخم ويصدر فلورة، والذي يسجل في نهاية كل دورة.
تؤكد زيادة الفلورة تعبير الجين المستجيب للعدوى في دماغ الفأر المصاب.
إصابة جميع الفئران باستخدام خلايا العوالق أو خلايا حالة الأغشية الحيوية وإجراء القتل الرحيم كما هو موضح في البروتوكول النصي. بعد ذلك، استخلاص الحمض النووي الريبي الكلي من نسيج الدماغ باستخدام مجموعة استخراج RNA.
لكل فأر، استخدم نسيج دماغ كامل لاستخراج RNA. قسم أنسجة الدماغ بالكامل إلى خمسة أنابيب. خذ حتى 100 ملليغرام من نسيج الدماغ وأضف 1 ملليتر من محلول التحلل إلى كل أنبوب يحتوي على مصفوفة التحلل التي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية