عدوى الفم في ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر بالبكتيريا الممرضة

خذ قارورة بغطاء يحتوي على أجار المغذيات مغطاة بورق فلتر.

ضع تعليق البكتيريا الممرضة على ورق الفلتر.

أدخل ذبابة ذبابة الفاكهة الجائعة في القارورة، ثم ضع الغطاء. حضن للسماح بالتغذية وضمان ابتلاع البكتيريا.

تدخل البكتيريا المبتلعة الأمعاء وتخترق الغشاء الواقي الذي يحيط باللومين.

تلتصق البكتيريا بالظهارة الأساسية، وتطلق سموما تعزز تلف الظهارة وغزوها، وتستعمر الأنسجة الداخلية.

اغمر الذبابة في الكحول لإزالة البكتيريا المرتبطة بالسطح، ثم اشطف لإزالة الكحول.

أضف حاجز وتوحيد الذبابة لإطلاق المحتوى البكتيري الداخلي.

قم بتخفيفات متسلسلة للمتجانس في صفيحة دقيقة. بعد ذلك، قم بوضع التخفيفات على أجار المغذيات وحضنها للسماح بتكوين المستعمرة.

عد المستعمرات لتحديد عدد الخلايا البكتيرية الحية الناتجة عن عدوى الفم في الذبابة.

قبل العدوى الفموية بساعتين إلى أربع ساعات، انقل الذباب إلى قوارير أجار القياسية التي لا تحتوي على طعام. وفي الوقت نفسه، حضر قارورة عدوى لكل ذبابة.

أولا، قم بتحميل غطاء أنبوب عينة بسعة 7 مليليتر بسعة 500 ميكرولتر من السكر أجار القياسي ودعه يتصلب. بعد ذلك، ضع قرص ورق فلتر في الأجار. ثم قم بماصة 100 ميكرولتر من الزراعة البكتيرية مباشرة على قرص الفلتر. للضبط، استخدم ماء السكروز 5٪.

بعد فترة التجويع، انقل ذبابة واحدة إلى الأنابيب المحضرة. بعد حضانة الذباب لمدة 18 إلى 24 ساعة، قم بتعقيم الذباب على السطح. تحميل الأفراد في أنبوب يحتوي على 100 ميكرولتر من 70٪ إيثانول.

بعد 20 إلى 30 ثانية، أزل الإيثانول واستبداله ب 100 ميكرولتر من الماء المقطر الثلاثي. بعد 20 إلى 30 ثانية أخرى، أزل الماء. ثم أضف 100 ميكرولتر من PBS وتوحيد الطعم الصناعي.

انقل التجانس إلى الصف العلوي من صفيحة تحتوي على 96 بئر وأضف 90 ميكرولتر من 1x PBS إلى كل بئر أسفل. ثم، باستخدام 10 أليكوات ميكرولتر، يتم تخفيف هذه العينة تدريجيا لتمييز نطاق من قيم CFU. بعد ذلك، قم بتلوين التخفيفات التسلسلية على لوح LB من أجار المغذيات في قطرات بسعة 5 ميكرولتر.

ضع القطرات بحيث تكون موجودة بشكل سري على اللوحة. ثم احتضن الطبق طوال الليل. في اليوم التالي، احسب عدد وحدات التخفيفات التي تنتج 10 إلى 60 مستعمرة مرئية بوضوح.