عزل البكتيريا من الأمعاء الوسطى البعوض

ابدأ بشريحة تحتوي على بعوضة بالغة مخدرة في قطرة من محلول ملحي مخدر بالفوسفات أو PBS.

تحت المجهر التشريحي، قم بإزالة أرجل البعوضة وأجنحتها ورأسها.

اقطع طرف البطن لتجنب إلحاق الضرر بالجهاز الهضمي.

ثبت الصدر ونهاية البطن، ثم اسحب الجهاز الهضمي بلطف لاستخراجه.

يشمل الجهاز الهضمي المستخرج الأمعاء الوسطى، المسؤولة عن الهضم وتحتوي على بكتيريا أمعاء متنوعة تؤثر على فسيولوجيا البعوض.

تحت التكبير الأعلى، قم بإزالة الهياكل المحيطة بعناية لعزل الأمعاء الوسطى.

انقل الأمعاء الوسطى المعزولة إلى أنبوب جديد يحتوي على PBS.

تجانس الأمعاء الوسطى لإطلاق البكتيريا في PBS.

انشر الطبقة المتجانسة المخففة على طبق أجار مغذي.

حضن الصفيحة للسماح للمستعمرات البكتيرية بالنمو، والتي تمثل الفلورا الميكروبية في الأمعاء الوسطى للبعوضة.

قم بتشريح البعوضة بشكل منفصل على شريحة زجاجية معقمة تحتوي على قطرة من PBS. قم بإزالة أرجل البعوضة وأجنحتها ورأسها بعناية باستخدام الملقط.

قم بتثبيت صدر البعوضة والجزء الأخير من البطن بالملقط وافصلها لعزل الجهاز الهضمي.

استخدم الملقط لإزالة المحصول وأنبوب المالبيغيان من الجهاز الهضمي. يوضع المحصول في المقدمة من الأمعاء الوسطى ويبرز بعد تناول ماء السكر. أنابيب المالبيغيان هي مجموعة من أنابيب الإخراج النحيلة عند تقاطع الأمعاء الوسطى والخلفي.

ضع الأمعاء الوسطى المقطعة في أنبوب EP مع مخزن PBS معقم بسعة 200 ميكرولتر واطحنها باستخدام مدقة الطحن المعقمة في الطاولة النظيفة جدا. قم بتخفيف التجانس بشكل تسلسلي إلى ثلاث تخفيفات بمقدار 10 مرات عند 50 ميكرولتر من كل تخفيف إلى صفيحة LB Agar ثم نشر اللوح.

حضن الصفيحة على درجة حرارة 37 لمدة يوم إلى يومين حتى تظهر مستعمرات منفردة.