موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:29 دقيقة • February 2nd, 2026
ابدأ بأجنة سمك الزرد المعدلة وراثيا تعبر عن بلاعم معلمة فلورية، مركبة في أجوروز منخفض الذوبان في طبق تصوير.
تصاب هذه الأجنة بمتفطرة المارينوم الموسومة فلورية عن طريق حقن عضلي دقيق في منتصف الدماغ، مما يثير استجابة مناعية موضعية.
غط الأجاروز المتصلبة بوسط جنين يحتوي على أدوية مخدرة للحفاظ على التخدير ومثبطات كيميائية لكبح التصبغ، مما يضمن وضوح بصري للتصوير.
ضع الطبق في غرفة البيئة بمجهر كونفوكال عالي الدقة.
باستخدام إضاءة المجال الساطع، حدد موقع المنطقة المصابة.
تفعيل قنوات الليزر الفلورية، وضبط مواقع بداية ونهاية المكدس Z، وبدء تصوير التايم لابس.
تخيل البلعم الملوثة، المليئة بالبكتيريا الفلورية، وهي تصبح مستديرة وغير متحركة.
وهذا يشير إلى انهيار الهيكل الخلوي وبداية موت الخلايا الليتيكية.
مع مرور الوقت، تنتفخ البلاعميات وتتمزق، مما يطلق محتويات سيتوبلازم وبكتيريا داخلية في الأنسجة المحيطة، وهو علامة مميزة لموت الخلايا الليتيكية الالتهابية.
بمجرد أن يتصلب الأغاروز تماما، غطه بطبقة من ماء البيض. بعد إعداد غرفة البيئة، ضع الطبق ذو القاع الزجاجي بقطر 35 ملم مع سمك الزرد في غرفة البيئة. افتح دايود 405، الأرجون بقوة 20٪، وليزر DPSS 561 نانومتر. قم بضبط قوة الليزر المناسبة في إعدادات Spectrum.
اختر وضع الاستحواذ "XYZ" و"المسح التسلسلي" ، وضبط تنسيق الصور على "512 × 512 بكسل". انتقل إلى "وضع البيانات الحية"، واستهدف موقع أول سمكة زردية، وحدد موقعي "ابدأ" و"إنهاء" Z. كرر هذه العملية لكل جنين متبق. أضف "توقف" في نهاية البرنامج. حدد الحلقة ودورة البرنامج، واحفظ الملف.