التقييم الصناعي لقتل البكتيريا بواسطة الخلايا البلعمية الطحالية للفئران الوليدة

ابدأ بتفكيك ميكانيكي طحال الفئران حديثي الولادة لتوليد تعليق خلية واحدة.

انقل التعليق إلى أنبوب، جهاز طرد مركزي، وأخرج السوبرناتانت.

أعد تعليق الحبيبة في حاجز التحلل للقضاء على الكريات الحمراء.

أضف المخزن المؤقت والطرد المركزي مرة أخرى، وأزل السوبرناتانت.

أعد تعليق الخلايا في المخزن واحتضن بحبيبات مغناطيسية مغطاة بالأجسام المضادة تستهدف مستقبلا يعبر عنه على العدلات والخلايا الأحادية الالتهابية.

استخدم جهاز الطرد المركزي وإزالة الخرزات غير المربوطة. أضف المخزن المؤقت (buffer)، ثم مرر التعليق عبر عمود مغناطيسي حديدي وطبق مجالا مغناطيسيا للحفاظ على الخلايا المرتبطة بالخرز.

قم بإزالة المجال المغناطيسي، وسحب الخلايا باستخدام المخزن الكهربائي، وزرعها في صفيحة متعددة الآبار.

أضف تركيزات متزايدة من البكتيريا المتوهجة إلى الآبار المختارة.

حضانة للسماح للعدلات والخلايا الأحادية باستيعاب البكتيريا عن طريق البلعمة.

استبدل الوسط بوسط يحتوي على مضادات حيوية للقضاء على البكتيريا غير المداخلة.

تسجيل التلميع على فترات منتظمة لتقييم استيعاب البكتيريا والقتل اللاحق الناتج عن البلعمة.

لإجراء اختبار قتل البكتيريا في المختبر، ضع الطحال غير المصاب في مصفاة نايلون بحجم 40 ميكرومتر داخل طبق بتري معقم بقطر 60 ملم يحتوي على 5 ملليلتر من PBS مع 10٪ مصل بقري جنيني، واستخدم مكبس حقنة معقمة بسعة 3 ملليلتر لتفكيك الأنسجة إل