JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 3:45 د • February 2nd, 2026
ابدأ بجراء فئران حديثة الولادة متطابقة في الأعمار.
ارفع الجلد في مؤخرة عنق كل جرو بلطف. حقن جرو واحد تحت الجلد بتعليق منخفض التركيز من البكتيريا الممرضة وآخر بتعليق عالي التركيز.
تعبر هذه البكتيريا عن أوبيرون مضيء حيوي ينتج إنزيم اللوسيفيراز وركزته، مما يتيح انبعاث الضوء بشكل مستقل.
تحيط كبسولة حماية من البوليساكاريد بالبكتيريا وتخفي مستضداتها السطحية، مما يمنع خلايا الجهاز المناعي للجراء التعرف عليها.
أعد الجراء إلى والدتهم البيولوجية للرعاية بعد الولادة.
تكاثر البكتيريا في موقع الحقن يسبب الالتهاب وزيادة نفاذية الأوعية، مما يمكن دخول البكتيريا إلى مجرى الدم والانتشار الجهازي.
ضع الجراء المخدرين تحت نظام تصوير متوهج.
يؤكسد لوسيفراز الركيزة لإنتاج الضوء المرئي، مما يسمح برؤية البكتيريا داخل الجراء.
التقط صورا مع مرور الوقت لمقارنة نمو البكتيريا وانتشارها في الجراء الملقحة بتركيزات بكتيرية عالية ومنخفضة.
ابدأ بوضع الجراء المتطابقة في الأعمار في مجموعات جراءات ذات جرعات عالية أو منخفضة داخل خزانة من المستوى الثاني للسلامة البيولوجية. في اليوم الثالث أو الرابع بعد الولادة، سجل أوزان جميع الجراء قبل التطعيم.
قم بتحميل حقن الأنسولين بمتلازمة PBS أو جرعة عالية أو منخفضة من E. حقن القولون لوكس في خزانة السلامة البيولوجية وضع الحقن المحملة على الثلج.
ضع الطفل الجديد ليحقن على سطح نظيف داخل خزانة السلامة الحيوية وارفع الجلد عند مؤخرة الرقبة كما لو كنت تمسك الجرو. أدخل الإبرة بحافة تحت الجلد مباشرة في المساحة التي تنشأ بين الجلد والعضلة. عندما يمكن الشعور بالإبرة تحت الجلد، حقن 50 ميكرولتر من اللقاح مع تحرير الجزء المضغوط من الجلد في الوقت نفسه لمنع التدفق العكسي. ثم أزل الإبرة ببطء وبحذر.
عندما يتم حقن جميع الجراء بنفس الطريقة، أعد الجراء إلى أمهاتهم. مباشرة بعد الحقن وفي الأوقات التجريبية المناسبة بعد ذلك، ضع القفص مع الإستروجين. الفئران المصابة بالقولون لوكس والدم في غطاء تدفق طبقي بمستوى السلامة البيولوجية الثاني وفتح البرنامج في كمبيوتر الميكرو CT. بعد تهيئة النظام وانتظار قفل درجة حرارة المرحلة عند 37 درجة مئوية وقفل درجة حرارة CCD عند سالب 90 درجة مئوية، ضع ما يصل إلى أربعة جراء مخدرين على صندوق التصوير في غرفة التصوير في وضعية الاستلقاء.
أغلق باب غرفة التصوير واختر خيار التصوير المضيء. اختر فلتر فتح والتالي، ثم اضبط مرشح الإثارة للحجب وفلتر الانبعاث ليفتح. اختر 500، 520، 560، 580، 600، و620 نانومتر.
ثم صور الجراء قبل إعادتها إلى القفص مع الأم، مع المراقبة حتى التعافي من التخدير.