الكشف الميداني عن البكتيريا في أقسام أنسجة لثة الفئران

خذ مقطعا لثويا من الفأر ملوثا ببكتيريا مرضية، معالج مسبقا للوصول إلى الحمض النووي البكتيري.

ضع عازلا باستخدام مسبار DNA موسوم بالديجوكسيجينين يستهدف الحمض النووي البكتيري.

ضع غطاء وختم لمنع جفاف العينة.

إدخال الحرارة لتغيير طبيعة الحمض النووي، ثم حضانه في ظروف حارة ورطبة للسماح بتهجين المجسات.

قم بتبريد السلايد وإزالة غطاء الغطاء (غطاء)، واغسله عدة مرات باستخدام المخزن لإزالة المجسات غير المربوطة.

أضف محلول حاجب لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

حضن الأجسام المضادة المترابطة بالإنزيمات التي ترتبط بالديجوكسيجينين.

اغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المربوطة.

أضف مثبطا لتعطيل الإنزيم الداخلي بشكل انتقائي.

ضع ركيزة تتفاعل مع الإنزيم لإعطاء ترسيب ملون.

اشطف بالماء لإزالة الركيزة الزائدة.

أضف صبغة لتلوين النوى.

اغسل لإزالة الصبغة الزائدة.

جفف بالإيثانول وعالجها بالزيلين لزيادة شفافية الأنسجة.

اركب القسم.

تحت المجهر، اتصور البكتيريا داخل القسم.

ابدأ التصوير في الموقع بغمر الشرائح أولا في 2x SSC لمدة 20 دقيقة. وفي الوقت نفسه، قم بتخفيف المجس الموسوم إلى 1 نانوغرام لكل ميكرولتر في مخزن التهجين. بالنسبة للتحكم السلبي، استخدم تركيز 10 أضعاف المجس غير المعنون. ثم قم بتغيير طبيعة المجسات بتسخينه على 90 درجة مئوية لمدة 10 دقائق، ثم تبريده بسرعة على الثلج.

بعد ذلك، طبق نفس حجم تخفيف المجس على كل شريحة مثل بر