تصور عدوى المسالك البولية في نموذج فأر باستخدام التوهج الحيوي

ابدأ بفأر مخدر، وباستخدام قسطرة، حقن معلق من البكتيريا الممرضة في المثانة البولية.

تحمل هذه البكتيريا أوبرا مضيئة حيويا، مما يتيح إنتاج الضوء الذاتي لتتبع العدوى.

البطانة الداخلية للمثانة هي ظهارة متخصصة تفصل التجويف عن النسيج الداخلي.

ترتبط بروتينات الالتصاق البكتيري بمستقبلات الجليكوبروتين على سطح الظهارة المضيف، مما يؤدي إلى تحفيز التداخل الخلوي الذي ينظمه المستقبل.

تتكاثر البكتيريا الداخلية لتكوين مجتمعات بكتيرية داخلية كثيفة.

تعبر البكتيريا عن الأوبيرون الحيوي المتوهج، منتجة إنزيم لوسيفيراز ومجمع إنزيمات يصنع ركيزة اللوسيفيراز.

يؤكسد لوسيفراز الركيزة ليصدر ضوءا مرئيا.

ضع الفأرة داخل غرفة التصوير والتقاط إشارة التوهج الحيوي.

اختر منطقة الاهتمام وقم بقياس شدة التلألؤ الحيوي.

راقب هذه الإشارة مع مرور الوقت كمؤشر فوري لحمل البكتيريا وتطور العدوى.

افتح برنامج اكتساب BLI وانقر على تهيئة في جهاز التصوير لاختبار نظام التحكم بالكاميرا والمسرح وتبريد كاميرا الجهاز المرتبط بالشحنة إلى ناقص 90 درجة مئوية. انقر على الاستحواذ، الحفظ التلقائي إلى. اختر اللمعان والتصوير. تحقق من إعدادات الإضاءة الافتراضية عن طريق ضبط مرشح الإثارة على Block وفلتر الانبعاث على Open.

اضبط وقت التعريض على تلقائي عند التقاط الصورة الأولى. لقياسات الجسم الحي، والإشارات الساطعة، اضبط وقت التعريض إلى حوالي 30 ثانية. قلل وقت التعريض إذا ظهر تحذير بسبب صورة مشبعة.

اختر الوضع المتوسط، F/Stop واحد، واختر مجال الرؤية الصحيح. اضبط ارتفاع الموضوع إلى 1 سنتيمتر عند تصوير الفأرات. صور حتى 5 فئران في نفس الوقت وافصل باستخدام حاجز الضوء لمنع الانعكاس.

أغلق الباب واضغط على Acquire لبدء تسلسل التصوير. ثم املأ معلومات مفصلة عن التجربة. أخرج الفئران من غرفة التصوير وأعيدها إلى قفصها. تحقق من التعافي الكامل بعد التخدير. ثم أعد الأقفاص إلى الرفوف المهوية حتى دورة التصوير التالية.

ابدأ برنامج التصوير وقم بتحميل الملف التجريبي بالنقر على تصفح (Browse). استخدم لوحة الأدوات لضبط مقياس ألوان الصورة. استخدم أدوات ROI لرسم منطقة ذات اهتمام على الصورة، مع التأكد من أنها كبيرة بما يكفي لتغطية المساحة كاملة واستخدام نفس الأبعاد لجميع الصور. ثم اضغط على قياس العائد على الاستثمار لقياس شدة الضوء.