تحضير نسيج مثانة الفئران لرؤية العدوى البكتيرية

ابدأ بفأر تم إعداده بمثانة مكشوفة، ملوثة مسبقا بالبكتيريا الممرضة.

تغزو البكتيريا البول وتشكل مستعمرات متعددة. عند النضج، تمزق هذه البكتيريا الخلية الظهارية وتصيب الخلايا المحيطة.

أدخل قسطرة متصلة بحقنة مملوءة بالمثبت. قم بغرس المثبت تدريجيا لنفخ المثانة والحفاظ على هندستها.

ثبت الإحليل للحفاظ على المثبت والحفاظ على شكل المثانة.

أزل القسطرة، ثم اقطع الإحليل. انقل المثانة إلى مادة تثبيت جديدة وحضن العضلات للحفاظ على البنية.

قسم المثانة إلى كوبين نصف المثانة لكشف الالتهاب المبولي، ثم اشطفها باستخدام حاجز مؤقت.

قم بالصبغ بمادة معدنية لتعزيز التباين، ثم اغسله بماء فائق النقي.

جفف الأقسام باستخدام تدرج الإيثانول، ثم تجفيف النقاط الحرجة.

اقطع كل كوب مثانة جافة إلى نصفين.

العينة الآن جاهزة للمعالجة لاحقا لرؤية تفاعلات المضيف مع الممرض.

بمجرد استخدام حقنة رأس السليب مع المثبت، قم بتثبيت قسطرة في الطرف، والحافة موجهة لعلامات الحقنة.

اقطع الأنبوب الزائد على بعد 1 إلى 2 مليمتر من نهاية الإبرة، مع الحرص على عدم كشف طرف الإبرة. حرك الحقنة لإزالة الفقاعات وادفع المكبس إلى الهواء الفراغي. ثم املأ القسطرة بالمثبت فوق أنبوب طرد مركزي دقيق. بعد تخدير الفأر والتضحية به، وبعد تثبيت الأرجل، افتح منطقة الحوض بالملقط ومقص جراحي لتكشف المثانة. ادفع الدهون المجاورة بحذر، لكن اترك المثانة في مكانها.

أمسك الحقنة باليد المسيطرة مع توجيه الإبرة للأسفل. اغمس طرف القسطرة في مادة تشحيم معقمة ووضع طرف القسطرة عند فتحة الإحليل، مع إبقاء فوهة الحقنة بزاوية 30 إلى 45 درجة فوق جسم الفأر.

اضغط للأسفل بحركة خفيفة باتجاه عقارب الساعة وأدخل القسطرة بلطف في الإحليل. عند دخول طرف القسطرة، قم بتوجيه الحقنة نحو ذيل الفأر مع الاستمرار في تمرير القسطرة إلى داخل الإحليل حتى يصبح فوهة الحقنة موازية لسطح العمل. يجب أن يدخل عمود إبرة القسطرة بالكامل إلى الفأرة، مع وضع طرف القسطرة داخل تجويف المثانة. قم بتوصيل 50 إلى 80 ميكرولتر من المثبت ببطء، مما يجعل المثانة تنتفخ مثل البالون.

حافظ على القسطرة في مكانها وارفع الحقنة قليلا، مع ميل الطرف للأعلى. باليد الأخرى، افتح الهيموستات وادخل شوكة واحدة تحت إبرة القسطرة عند تقاطع الإحليل. أغلق النسيج الدموي جزئيا حتى يلامس الإبرة فقط.

قم بإخراج إبرة القسطرة بلطف من المثانة مع تثبيت وتثبيت الهيموستات بالكامل لمنع فقدان المثبت. أمسك بالجهاز بحيث يكون موازيا لسطح العمل مع استقرار المثانة فوقه. ارفعي بلطف وقطعي بحذر تحت الهيموستات لإزالة المثانة التي لا تزال الهيموستا متصلة.

ضع المثانة وربط الهيموستات في أنبوب فالكون يحتوي على مثبت دافئ. تأكد من أن المثانة مغمورة بالكامل في السائل وليست مضغوطة بجدران الأنبوب.

لتصوير المثانة باستخدام المجهر الإلكتروني الماسح، قم بقطعها إلى نصفين بشفرة حلاقة نظيفة مزدوجة الجوانب أو مشرط، وقم بعمل قطع ثان مماسي للنصف الدموي لتحرير المثانة. ينتج عن ذلك كوبين نصف المثانة. إذا كانت هناك أي وسادات دهنية متبقية على الجزء الخارجي من المثانة، قم بإزالتها بلطف.

اشطف المثانة إلى نصفين ثلاث مرات في محلول كاكوديلات الصوديوم. صبغ النسيج ب 1٪ من أوزميوم رباعي الأكسيد في محلول كاكوديلات 0.15 مولر لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة. قم بهذه الخطوة باستخدام وعاء التلوين الملفوف بورق الألمنيوم للحفاظ على بيئة مظلمة. بعد التلوين، اشطف نصفين المثانة ثلاث مرات في ماء فائق النقي.

إذا شوهد زيت متماسك على سطح الماء، قم باستنشاقه أو امتصاصه لمنع التلوث أثناء خطوات التجفيف. بعد تجفيف الأنسجة، اقطع المثانة إلى نصفين باستخدام شفرة حلاقة نظيفة مزدوجة الوجه لإنتاج أربع قطع إجمالية.