JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:12 د • February 26th, 2026
ابدأ بصفيحة متوسطة غنية بالمغذيات تحتوي على عشب من البكتيريا الممرضة إيروموناس.
انقل ديدان C. elegans في المرحلة L4 التي تعبر عن GFP الخاص بالعضلات إلى العشب البكتيري وحضنها.
الديدان تبتلع البكتيريا مع العناصر الغذائية. وهذا يسمح للبكتيريا بالوصول إلى الأمعاء واستعمارها.
باستخدام نظام إفراز متخصص، ينقل أيروموناس عوامل الضراوة إلى خلايا أمعاء الدودة.
تنتشر هذه العوامل الضراوة إلى جدار الجسم، حيث تعطل العضلات، مما يسبب أضرارا هيكلية ونخر.
انقل الديدان يوميا إلى طبق جديد مع عشب بكتيري للحفاظ على التعرض المستمر للممرضات.
ضع الديدان على جل أغاروز مع مادة مخدرة لتخديرها، ثم ضع غطاء داخلي.
باستخدام مرشح GFP، يلتقط صور الفلورة على فترات منتظمة.
يشير الفقدان التدريجي لإشارة GFP إلى اضطراب عضلي في C. elegans، الذي يمثل نخر عضلي ناتج عن Aeromonas أثناء تفاعل المضيف والممرض.
بعد زراعة سلالات إيروموناس وضبط الامتصاص وفقا لبروتوكول النص، قم بتحديد ونشر المرق البكتيري على ألواح NGM.
بعد ذلك، انقل 50 دودة L4 إلى كل صفيحة NGM. كل 24 ساعة، انقل الديدان إلى صفائح NGM الطازجة. اختر عشوائيا 10 ديدان وانقلها إلى جل أغاروز بنسبة 2٪ في M9 medium على شريحة (slide).
وأخيرا، ضع غطاء على الجل والتقط صور عضلية باستخدام فلتر بروتين فلوري أخضر على مجهر فلوري مزود بكاميرا.