JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:11 د • February 26th, 2026
خذ طبقين يحتويان على مصفوفات ألجينات مطبوعة ثلاثية الأبعاد، كل منهما يغلف إما سلالات البكتيريا الضابطة أو الاختبارية.
كلا السلالتين يعبران بشكل تركيبي عن بروتين فلوري للتصور. تحتوي السلالة التجريبية أيضا على جين محفز لإنتاج ألياف خارج الخلية البروتينية تسمى ألياف كورلي.
تطبع الأنماط على وسط صلب مدعوم بالكالسيوم والرامنوز.
حضن ذلك للسماح لأيونات الكالسيوم بالربط المتقاطع مع الألجينات، مكونة هيدروجيلا.
في السلالة التجريبية، يحفز الرامنوز إنتاج وحدات كورلي الفرعية، التي تتجمع ذاتيا على سطح الخلية لتصبح ألياف.
استخدم ماسح فلورسنت لتصوير الأنماط.
عالج بمحلول مخلب للكالسيوم وحضن الرج لاحتجاز أيونات الكالسيوم، مما يعطل الروابط المتقاطعة للألجينات ويذيب الهيدروجيل.
تخلص من الحل وأعد تصوير الأنماط.
تسبب العلاج في ذوبان نمط التحكم، بينما بقي نمط الاختبار سليما بسبب شبكة تثبيت ألياف الكورلي.
حضن العينات المطبوعة في درجة حرارة الغرفة لمدة ثلاثة إلى ستة أيام للسماح بإنتاج مكونات الفيلم الحيوي، مثل ألياف كورلي.
ثم ضع اللوحة على جهاز ماسح فلوري وصور اللوحات.
لإذابة مصفوفة الألجينات، أضف 20 ملليلتر من محلول سترات الصوديوم بوزن 0.5 مولر عند درجة حموضة 7 إلى الركيزة المطبوعة، واحتضن اللوح في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين مع هز 30 دورة في الدقيقة.
ثم تخلص من السائل وصور الألواح مرة أخرى لمقارنتها بصور الألواح قبل وبعد معالجة السترات.