دراسة النشاط الميكروبي للأمعاء البشرية على السكريات الخارجية

ابدأ بالفائض الناتج عن ميكروبيوم الأمعاء البشرية أثناء التخمير الصناعي للسكريدات الخارجية (exopolysaccharides). يحتوي الفائق على أحماض دهنية قصيرة السلسلة منزوعة البروتون (SCFAs) ومستقلبات أخرى.

أضف حمض الميتافوفوسفوريك لخفض درجة الحموضة للمادة الفائقة ودوامة لخلطها جيدا. يحول هذا الحمض النووي الفائق إلى أشكالها المزينة بالبروتونات، مناسبة لتحليل كروماتوغرافيا الغاز.

الطرد المركزي لفصل الحطام وجمع المادة الفائقة التي تحتوي على SCFAs ومستقلبات أخرى.

قم بتصفية المادة الفائقة لإزالة الحطام المتبقي وتجنب التداخل مع الكروماتوغرافيا.

في نظام كروماتوغرافي الغاز عالي الأداء، يتم حقن المادة الفائقة في المدخل الساخن لتبخيره. ثم اخلط البخار مع غاز خامل ومرره عبر عمود طور قطبي ثابت للفصل.

تتفاعل أحماض SCFA مع الطور الثابت للعمود وتنفصل بناء على تطايرها، حيث تخرج الأحماض ذات السلسلة الأقصر أبكر من الأحماض الأطول.

تحديد تركيزات SCFAs المختلفة من خلال مقارنة النتائج مع المعايير الداخلية. يعكس ذلك تحلل ميكروبي للسكريدات الخارجية تحت ظروف شبيهة بالأمعاء

لدراسة تأثيرات EPS على إنتاج SCFA، أضف 1 ملليلتر من المواد الفائقة المخمرة إلى أنابيب الطرد المركزي بسعة 2 ملليلتر وأضف 0.2 ملليلتر من حمض الميتافوسفوريك بنسبة 25 وزن/حجم لكل عينة. دوامة لخلط الحلول بشكل كامل. قم بطرد المركزي بالخليطات بضغط 13,000 مرة في الغرام لمدة 20 دقيقة.

وفي هذه الأثناء، حضر محاليل من أحماض الخليك، البروبيونيك، البيوتيريك، الإيزوبيوتيريك، الفاليريك، والإيزوفاليريك في أنابيب. ثم أضف 1 ملليلتر من كل حمض جاهز إلى أنبوب يحتوي على 1.2 ملليلتر من حمض الميتافوسفوريك بنسبة وزن/حجم 25 وتحميلها في زجاجة عينة جهاز الكروماتوغرافيا الغازية ككوكتيلات قياسية.

أخرج الأنابيب من جهاز الطرد المركزي، وانقل المواد الفائقة إلى أنابيب جديدة. استخدم حقنة مزودة بفلتر 0.22 ميكرون لترشيح المواد الفائقة إلى أنابيب جديدة لتحليل الكروماتوغرافيا الغازية.