تحضير جرعة غاردنيلا المهبلية لنمذجة التهابات المسالك البولية المتكررة في الفئران

قم بتقييم سلالة مقاومة للمضادات الحيوية من G. vaginalis، وهي بكتيريا لاهوائية مرتبطة بالتهابات المسالك البولية في الفئران.

خلال العدوى الأولية للمثانة، يقوم الإشريكية القولونية الممرضة بإنشاء خزانات هادئة داخل خلايا ظهارة المثانة.

التعرض اللاحق ل G. vaginalis يؤدي إلى تساقط الخلايا السطحية الناتج عن السموم، مما يسمح بظهور UPEC الخامد مرة أخرى والتسبب في التهابات المسالك البولية المتكررة.

لتحضير لقاح G. vaginalis ، ضع المخزن على طبق أجار مغذي بدون مضادات حيوية لتمكين تعافي البكتيريا.

حضن بشكل لا هوائي للحصول على مستعمرات نشطة النمو.

انقل حلقة من المستعمرات الكثيفة إلى مرق مغذي خال من المضادات الحيوية.

حضن بشكل ثابت تحت ظروف لا هوائية حتى يتم الوصول إلى تركيز البكتيريا المطلوب.

قس الكثافة البصرية لتقدير التركيز.

انقل التعليق إلى أنبوب، ثم استخدم الطرد المركزي لإزالة البكتيريا، ثم تخلص من الفائق الفائق، وأعد تعليقه في مخزن مؤقت.

جهز مخففات متسلسلة ووضعها على وسط يحتوي على مضادات حيوية للسماح بالنمو الانتقائي لالتهاب الميداني المهبلي ومنع التلوث. عد المستعمرات لتحديد تركيز اللقاح.

ابدأ بتدوير ال G. تتمدد المهبل من مخزون فريزر بدرجة ناقص 80 درجة مئوية إلى غرفة لاهوائية. انثر البكتيريا على صفيحة NYCIII بدون مضادات حيوية. حضن الطبق عند 37 درجة مئوية بشكل لاهوائي لمدة 24 ساعة.

في الحجرة اللاهوائية، قم بتطعيم خمسة ملليتر من وسط NYCIII اللاهوائي باستخدام حلقة ميكرولتر واحدة مليئة بالخلايا من صفيحة NYCIII، وحضن الزراعة بشكل ثابت عند 37 درجة مئوية تحت ظروف لاهوائية لمدة 18 ساعة. لا تدرج المضادات الحيوية في وسط النمو. حدد مقدار_{OD 600} للثقافة باستخدام مقياس طياف.

ثم قم بعمل الطرد المركزي عند 9,600 مرة في الغرام لمدة دقيقة واحدة واستنشق الوسائط. أعد تعليق الحبيبات البكتيرية في PBS إلى التركيز المطلوب وقم بتخفيف اللقاح وتغطيته بشكل تسلسلي.