موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:16 دقيقة • March 31st, 2026
ابدأ بفأر متصوب ببكتيريا ممرضة وفيروس.
يتلف الفيروس البطانة الظهارية في الجهاز التنفسي العلوي للفأر، مما يسهل انتشار البكتيريا من اللعوم الأنفي إلى الرئتين.
ضع رئتي الفئران المحجوزتين في طبق يحتوي على محلول ملحي مخزن بالفوسفات، أو PBS.
افرك الرئتين إلى قطع صغيرة وامزج جيدا.
انقل نصف نسيج الرئة إلى أنبوب يحتوي على متلازمة PBS.
ضع مسبار تجانس الأنسجة المعقم داخل الأنبوب الذي يحتوي على نسيج الرئة.
توحيد النسيج لإطلاق البكتيريا في PBS.
قم بتخفيف التجانس وطبقها على طبق أجار غني بالمغذيات.
حضن الصفيحة للسماح بتكوين مستعمرات بكتيرية.
عد هذه المستعمرات لقياس الحمل البكتيري في الرئة، الذي يعكس العبء البكتيري في الرئتين.
لجمع الرئة، استخدم مقص التشريح، اقطع جانبي القفص الصدري المكشوف واسحب الأضلاع بلطف نحو رأس الفأر لكشف القلب. أدخل إبرة قياس 25 متصلة بحقنة 10 ملليلتر مملوءة مسبقا ب PBS في البطين الأيمن وابدأ الترويش ببطء. ابحث عن تبييض الرئتين كمؤشر على نجاح التروية.
اغسل النسيج ببطء لتجنب كسر الأنسجة الرئوية. ارفع القلب بالملاقط وقم بعمل جرح لفصل الرئتين عن القلب. بعد الفصل، التقط جميع فصوص الرئة بالملاقط وشطفها في طبق يحتوي على متلازمة زبدة الزنزانة المعقمة لإزالة أي دم متبق.
في طبق بتري، اقطع الرئة إلى قطع صغيرة وامزج جيدا. قم بإزالة نصف خليط الرئة لتحديد الكتلة الكربونية الخالية من الرطوبة أو PFU الفيروسي وضعه في أنبوب دائري قاع بسعة 15 ملليلتر مملوء مسبقا ب 0.5 ملليلتر من PBS للتجانس.
لتوحيد الأنسجة المجمعة، نظف مسبار التجانس بوضعه في 70٪ إيثانول وتشغيل المجسم بقوة 60٪ لمدة 30 ثانية. كرر هذه الخطوة في ماء معقم لمدة 10 ثوان.
قم بتوحش كل نسيج لمدة دقيقة واحدة. لتعداد أعداد البكتيريا، يتم تخفيف الألواح بشكل متسلسل على ألواح الأجار الدموية. لحساب الوحدة الكلية، استخدم 10 ميكرولتر لتغليف العينات وتسجيل الحجم النهائي بالملليلتر لكل عينة. حضن الليلة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربون.