موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:04 دقيقة • February 26th, 2026
ابدأ بلوحة متعددة الحفر تحتوي على إدخال بئر مغطاة بالكولاجين.
أضف وسط تمدد إلى البئر.
تعزز العناصر الغذائية في الوسط تكاثر الخلايا، بينما تحافظ مثبطات التمايز على حالة تشبه الجذع.
أضف معلقا من عناقيد الخلايا الظهارية المستمدة من زراعة الخلايا الجذعية القولونية إلى البئر واحتضنها.
تلتصق الخلايا بالسطح المغطى بالكولاجين وتتلقى المغذيات من كل من الأقسام العليا والسفلية.
تمنع المثبطات تمايز الخلايا وتسهل تكاثر تجمعات الخلايا.
باستخدام مجهر التباين الطوري، راقب الثقافة.
بمجرد تكوين الطبقة الأحادية، استبدل وسط الزراعة بوسط جديد خال من مثبطات تمايز الخلايا.
يسهل ذلك تمايز الخلايا إلى خلايا ظهارية قولونية ناضجة ذات وصلات محكمة.
تفرز هذه الخلايا مخاطا وتطور طبقة أحادية وظيفية تحاكي الحاجز الفسيولوجي المعوي لدراسات تفاعل المضيف والممرض.
بيبيتي 600 ميكرولتر من وسط التمدد في المساحة تحت كل إدخال. بيبت 100 ميكرولتر من تعليق الخلية من القارورة في كل إدخال.
أعد الطبق إلى حاضنة زراعة الأنسجة واتركه دون إزعاج لمدة لا تقل عن 12 ساعة. تجنب هز أو إمالة اللوحة بشكل حاد. بعد الحضانة، ضع اللوح على مجهر ضوئي متباين الطور مع عدسة موضوعية تتراوح بين 2.5 إلى 10 أضعاف.
قم بتجديد الوسط باستخدام وسط الزراعة بدون مثبطات لإيقاف علاج التثبيط. استمر في تجديد الوسط كل يومين إلى ثلاثة أيام حتى يلتقي به.