توليد البلاستيدات النباتية من البكتيريا سالبة الجرام

خذ وسط يحتوي على مضاد حيوي يمنع انقسام الخلايا.

قم بتطعينه ببكتيريا سالبة الغرام على شكل قضيب.

حضن مع الرج.

في وجود المضاد الحيوي، تستمر البكتيريا في النمو دون انقسام وتشكل خيوطا طويلة.

اجمع الثقافة وقم بتحويلها إلى الطرد المركزي عند درجة حرارة منخفضة. تخلص من المادة الفائقة واغسل الخيوط بمحلول السكروز لمنع التحلل.

تخلص من محلول السكروز.

أضف مخزونا مخزنا يليه الإنزيمات وEDTA. يضعف EDTA الغشاء الخارجي، مما يسمح لليسوزيم بالدخول وتفكيك طبقة البيبتيدوغليكان.

هذا يزيل جدار الخلية، مما يسمح للخلية البكتيرية بالاكمشاك. ينكسر DNase I الحمض النووي الكروموسومي المنبعث من الخلايا ويمنع تكتل الخلايا.

أضف محلول منخفض التوتر مع دوران لطيف، مما يسمح للخلية بسحب الماء.

تمكن الأغشية المرنة الخلية من اتخاذ شكل كروي يسمى البلاست.

نقل قطعة تحتوي على البلاستيدات الكروية إلى أنبوبين مع محلول إيزوتوني مبرد لتثبيت الطبقات الكرتونية.

لتحضير البكتيريا البكتيرية القولونية سالبة الجرام، قم بتخفيف الزراعة الليلة بنسبة 1 إلى 100 في 25 ملليلتر من TSB في قارورة 250 ملليتر، وأعد البكتيريا إلى حاضنة الهز لمدة ساعتين ونصف إضافيتين. عندما يصل المحلول إلى كثافة بصرية تتراوح بين 0.5 إلى 0.8 عند 600 نانومتر، يتم تخفيف الزراعة بنسبة واحد إلى عشرة في TSB طازج في قارورة جديدة بسعة 250 ملليلتر لعملية حضانة ثانية مدتها ساعتين ونصف مع