موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:42 دقيقة • February 26th, 2026
خذ مزرعة من المكورات العقدية من المجموعة B أو GBS، وهو ممرض بكتيري انتهازي.
قم بتخفيف الزراعة في وسط جديد وحضنها للحصول على بكتيريا منتشرة بنشاط.
انقل الثقافة إلى أنبوب مخروطي.
يقوم بالطرد المركزي لطرد البكتيريا، ثم يتخلص من السوبرناتينت.
اغسل البكتيريا باستخدام المحلول الكهربائي.
قم بجهاز الطرد المركزي مرة أخرى، وإزالة السوبرناتانت، وأعد تعليق البكتيريا في الحاجز.
بعد ذلك، استخدم فأرة أنثى معالجة بالهرمونات ولديها ظهارة مهبلية جاهزة، أكثر عرضة للعدوى.
قيد الفأرة. باستخدام رأس ماصة دقيق، أطلق تعليق GBS في التلال المهبلي.
أطلق الفأر، ارفع ذيله، ودع الأقدام الأمامية تمشي على سطح صلب.
هذا يعزز احتباس اللقاح في التجويف المهبلي، مما يمكن الالتزام بمتلازمة GBS.
افحصي فتحة المهبل بحثا عن ارتداد تدفق اللقاح.
تستعمر البكتيريا الملتصقة سطح الظهارة المهبلية وتخلق عدوى.
نموذج الفأر المصاب بعدوى المهبل جاهز لمزيد من الدراسات.
في نفس يوم الحقن، ازرع مزرعة سائلة لمدة خمسة ملليتر طوال الليل من سلالة GBS المثيرة للاهتمام في مرق تود هيويت، أو THB، عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
في صباح اليوم التالي، قم بزراعة البكتيريا على حجم 1 إلى 10 في THB طازج لمدة ساعتين إلى ثلاث ساعات في حالة حضانة 37 درجة مئوية، حتى تصل البكتيريا إلى منتصف مرحلة اللوغاريتم. ثم ننقل الزراعة الفرعية إلى أنبوب مخروطي معقم بسعة 15 ملليتر، ويقوم بطرد مركزي للخلايا البكتيرية. أعد تعليق الحبيبات في 200 ميكرولتر من PBS المعقمة.
ثم رفع حجم التعليق الكلي إلى 1 ملليلتر من PBS لكل 10 فأرات، لتصل إلى OD600 و0.4 في أنبوب زراعة جديد بسعة 5 ملليتر. انقل الزراعة إلى أنبوب جديد بسعة 15 ملليتر، وأعد طرد البكتيريا. ثم أعد تعليق الخلايا في PBS عند عشر الحجم الأصلي.
احتفظ ب 50 ميكرولتر من البكتيريا للتخفيف المتسلسل والطلاء على أغار THB، لتحديد الوحدة الدقيقة للتلقيح الكامل. ثم اسحب 10 ميكرولتر من GBS إلى طرف ماصة تحميل هلام بسعة 200 ميكرولتر، وثبت الجلد الفضفاض يدويا عند مؤخرة الرقبة، بين الإبهام والسبابة، ثم تثبيت الذيل. أدخل طرف الماصة بمقدار 5 إلى 10 مليمترات في تجويف المهبل، ووزع كامل حجم اللقاح.
ثم أطلق الطرف فورا وارفع الذيل لرفع الطرف الخلفي للحيوان، بينما تمشي الأقدام الأمامية على سطح صلب. بعد دقيقة، افحصي فتحة المهبل بصريا بحثا عن أي تدفق عكسي للتلقيح.