موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:34 دقيقة • February 26th, 2026
خذ فأر أنثى استعمرت مهبليا مصابا بالمكورات العقدية من المجموعة B أو GBS، وهو ممرض بكتيري انتهازي في الجهاز المهبلي.
قيد الفأر وأدخل مسحة مبللة بطبقة العزل في التجويف المهبلي.
قم بتدوير المسحة بلطف مع تطبيق ضغط خفيف على جدار المهبل لإزالة البكتيريا السطحية.
اغمر المسحة في طبقة مؤقتة وحرك لتعليق البكتيريا.
قم بتخفيف التعليق في المخزن بشكل تسلسلي وطبقه على أجار تفاضلي كروموجيني يحتوي على ركيزة مرتبطة بكروموجين.
حضن للسماح بنمو البكتيريا.
خلال الحضانة، يعبر GBS عن إنزيم محدد يقوم بتحلل الركيزة الكروموجينية.
يخضع الكروموجين المنبعث لأكسيد وثنائية تلقائيا، مكونا مركبا ورديا أو بنفسجيا.
ينتج عن ذلك مستعمرات GBS باللون الوردي أو البنفسجي، والتي تختلف بصريا عن المستعمرات البكتيرية الأخرى.
عد المستعمرات لقياس حمل GBS وتقييم استمراريته في نموذج الفأرة.
قبل المسحة، بلل القطن مسبقا في PBS، وقيد أحد الفئران كما هو موضح للتو.
أدخلي المسحة بمقدار 10 مليمترات في تجويف المهبل، ولفيري بلطف أربع مرات مع عقارب الساعة، وأربع مرات عكس عقارب الساعة، مع تطبيق ضغط خفيف على جدار المهبل.
ضع المسحة في أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 ملليلتر يحتوي على 100 ميكرولتر من PBS، ثم قم بتدوير الأنبوب والمسحة لمدة حوالي 15 ثانية لتحرير البكتيريا من ألياف القطن. ثم يتم تخفيف كل عينة بشكل تسلسلي في PBS، وطبق 20 ميكرولتر من 1 إلى 10 إلى 10 إلى 10,000 تخفيف على صفيحة أجار متوسطة تفاضلية، محضرة حسب تعليمات الشركة المصنعة، للحضانة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. ستظهر مستعمرات GBS إما بلون وردي زاهي أو بنفسجي فاتح.