قياس كمية كبت الغشاء الحيوي الناتج عن الإنزيم في البكتيريا الممرضة
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:38 دقيقة • February 26th, 2026
خذ صفيحة دقيقة تحتوي على آبار تحكم وعلاج، كل منها ملقح ببكتيريا ممرضة تشكل الأغشية الحيوية.
تحتوي آبار المعالجة على إنزيم يعطل تكوين الغشاء الحيوي.
الحضانة تحت ظروف ميكرو-لاهوائية لخلق بيئة منخفضة الأكسجين. هذا يعزز إفراز جزيئات الإشارات البكتيرية التي تتوسط الالتصاق السطحي. في آبار العلاج، يقوم الإنزيم بتحليل هذه الجزيئات، مما يقلل من التصاق البكتيريا.
اغسل الآبار لإزالة الخلايا غير الالتصقة.
أدخل الوسط الطازج وحضن. تتكاثر البكتيريا الملتصقة وتفرز مواد بوليمية خارج الخلية، والتي تشكل مصفوفة الأغشية الحيوية.
أزل الوسط واغسل الآبار.
أضف صبغة كاتيونية وحضن للسماح بالارتباط بمكونات الغشاف الحيوي سالبة الشحنة.
اغسل لإزالة الصبغة غير المرتبطة.
حضن المذيب أثناء التحريك لإطلاق الصبغة المرتبطة في المحلول.
قم بقياس الكثافة البصرية أو OD لقياس الكتلة الحيوية للغشاء الحيوي.
انخفاض الجرعة الزائدة في آبار المعالجة يعكس انخفاض تكوين الغشاء الحيوي، الناتج عن ضعف التصاق الخلايا الأولي.
للبدء، ازرع مزرعة بسعة 5 ملليلتر من A.baumannii S1 في LB عند 30 درجة مئوية في حاضنة تهز لمدة 16 ساعة.
عدل الثقافة إلى OD600 بقيمة 0.8. ثم استخدم LB طازج يحتوي على 4 ملليغرام لكل ملليلتر من إنزيم GKL المنقى لتخفيف الزراعة من 1 إلى 100. وأضف 100 ميكرولتر إلى آبار صفيحة بسعة 96 بئرا.
استخدم الأغطية لتغطية الأطباق، وضعها في حاوية بل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية