التقييم المجهري لتثبيط تكوين الأغشية الحيوية بواسطة الإنزيمات

ابدأ بطبقين صغيرين بقاع زجاجي يحتويان على معلقات لبكتيريا تشكل الأغشية الحيوية.

يحتوي طبق العلاج على إنزيم نشط يعطل الإشارات، بينما يشمل الضابط الإنزيم المعطل.

غط الصحون وحضن البكتيريا للسماح بالالتصاق البكتيريا بسطح الميكروالصحن.

اغسل لإزالة الخلايا غير الالتصقة، ثم أدخل وسط طازج يحتوي على الإنزيمات وحضنها.

في طبق التحكم، تتواصل البكتيريا عبر جزيئات الإشارة وتنتج مواد بوليمية خارج الخلية (EPS)، مكونة طبقة حيوية.

يقوم الإنزيم النشط بتحليل جزيئات الإشارة، مما يعطل وظيفتها ويقلل من تكوين الأغشية الحيوية.

قم بتجديد الحوض بوسط جديد واحتضن المزيد لتعزيز تأثيرات الإنزيم في تعطيل الأغشية الحيوية.

أزل الوسط، أضف الليكتين الموسوم بالفلورية، وحضن للسماح لليكتين بالارتباط ب EPS.

اغسل لإزالة أي ليكتين غير مربوط.

حضن الطبق بمادة تثبيت للحفاظ على بنية الفيلم الحيوي، ثم شطف الطبق.

الحصول على صور المجهر الكونفوكالي لتقييم الكبت الذي ينظمه الإنزيم لتكون الأغشاء الحيوية.

لإجراء المجهر الماسح بالليزر الكونفوكي، أو CLSM، لأغشية A. baumannii S1 الحيوية، قم بزراعة مزرعة بحجم 5 ملليتر من A. baumannii S1 في الكتلة الدقيقة عند 30 درجة مئوية في حاضنة اهتزاز لمدة 16 ساعة. قم بضبط زراعة A. baumannii S1 إلى OD₆₀₀ بقيمة 0.8.

ثم استخدم LB طازج يحتوي على 1.2 ملليغرام لكل ملليتر من إنزيم GKL المنقى لتخفيف الزرعة، من 1 إلى 100