استخراج الحمض النووي الريبي من ليستريا مونوسيتوجينات المستخرجة من بلاعم الفأر المصابة

خذ أنبوبا يحتوي على ورق ترشيح يحتوي على ليستيريا مونوسيتوجينس. يتم جمع هذه البكتيريا من البلاعم المصابة في الفئران.

أضف حاجزا يحتوي على مثبطات RNase لمنع تحلل RNA، ثم قم بتدوير الأنبوب بزوايا متعددة لإزاحة البكتيريا.

يقوم بالطرد المركزي وينقل التعليق إلى أنبوب يحتوي على خليط من الفينول-الكلوروفورم-المنظف.

الدوامة والحضانة عند درجة حرارة مرتفعة لتعطيل أغشية البكتيريا، وتعطيل البروتينات، وتحلل البكتيريا، مما يطلق مكونات داخل الخلية.

جهاز طرد مركزي لفصل الطور المائي الغني بالحمض النووي الريبي عن المكونات الأخرى.

اجمع الحمض النووي الريبي وانقله إلى أنبوب يحتوي على أسيتات الصوديوم والإيثانول.

ثم يحتضن الدوامة، وعند درجة حرارة منخفضة.

أسيتات الصوديوم تعادلها الشحنة السالبة للحمض النووي الريبي، بينما تعزز ظروف الإيثانول والبرودة ترسيب الحمض النووي الريبي.

جهاز طرد مركزي لإطلاق الحمض النووي الريبي.

أزل المادة الفائقة واغسل الحبيبات بالإيثانول البارد.

استخدم الطرد المركزي مرة أخرى، وأزال السوبرناتان، جفف الهواء وأضف ماء خال من RNase.

احتفظ بالحمض النووي الريبي لمزيد من التحليل.

قم بإذابة الأنابيب التي تحتوي على الفلاتر على الثلج للحفاظ على برودتها. ثم أضف إلى كل أنبوب 650 ميكرولتر من EDTA أو مخزن AE البارد في الأسيتات الباردة.

بأسرع وقت ممكن، قم بتدوير أنبوب الفلتر بقوة بحيث يختفي الفلتر إلى أطراف الأنب