موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:06 دقيقة • March 31st, 2026
ابدأ بمثانة فأر مشحولة ومقطعة مصابة مسبقا بإشريكية قولونية ممرضة تعبر عن β جالاكتوزيداز، موضوعة في صفيحة متعددة الآبار مغطاة بالسيليكون.
يواجه تجويف المثانة للأعلى، كاشفا عن الخلايا الظهارية التي تحتوي على مجتمعات بكتيرية داخل الخلية، أو IBCs.
اغسل المثانة باستخدام حاجز لإزالة الحطام والبكتيريا غير المتصلة.
بعد ذلك، أضف مثبتا وحضانة للحفاظ على البنى الخلوية والبكتيرية.
أزل المثبت واغسل باستخدام حاجز مؤقت.
ثم يغسلها باستخدام محلول يحتوي على مسحوق غسيل لنفاذ أغشية الخلايا والبكتيريا.
أزل المخزن الخلفي، ثم أضف محلول X-gal، وهو ركيزة من β-جالاكتوسيداز مع مواد أكسدة اختزال، وقم بحضانته.
تدخل البكتيريا مواد X-gal ومواد الأكسدة الاختزال إلى البكتيريا. يشق β-جالاكتوسيداز X-gal، منتجا وسطا عديم اللون يتأكسد بواسطة كواشف الأكسدة ليشكل رسبا أزرق.
تحت المجهر التشريحي، تؤكد النقاط الزرقاء في المثانة وجود خلايا التهابية (IBC)، مما يشير إلى وجود عدوى في المسالك البولية.
لتعداد IBC، بعد حصاد المثانة، ضعها في بئر مغطى بالسيليكون في طبق بستة آبار مع PBS واستخدم المقص لتقطيعه إلى نصفين.
باستخدام دبابيس معدنية صغيرة موضوعة على الحواف الخارجية، فرد المثانة بلطف بحيث يكون التجويف متجها للأعلى ويتم كشف أكبر كمية من البول. بعد إجراء صبغة LacZ كما هو موضح في بروتوكول النص، لاحظ ال IBCs التي تظهر كنقاط زرقاء تحت مجهر تشريح.