موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:47 دقيقة • March 31st, 2026
ابدأ بشريحة مجهر مثقب وضع خزعة دائرية من النسيج فوق المنطقة المثقبة.
بعد ذلك، ضع حشوة مطاطية فوقها.
قم بقلب هذا التجميع وأدخله في الجزء السفلي من إطار غرفة التروية المعدنية.
قم بمحاذاة الإطار العلوي مع الأسفل وثبتهما.
استخدم الكاليبر لتأكيد ارتفاع الحجرة الموحد.
تتصل الحجرة بمضخة، والتي بدورها متصلة بخزان يحتوي على بكتيريا معلقة في المخزن الخادم.
ابدأ بإدخال التروية من التعليق البكتيري إلى الحجرة.
يسمح التثقيب المركزي في السلايد بدخول التعليق البكتيري إلى التجميع.
وهذا يمكن التفاعل بين البكتيريا وسطح الأنسجة، مما يعزز الالتصاق والاستعمار.
ينتج هذا الإعداد نموذجا في المختبر يحاكي استعمار البكتيريا في الجسم الحي على الأنسجة.
لبدء البروتوكول، ضع خزعة نسيجية معدة مسبقا بقطر 10 مليمترات، وبنفس السماكة بين شريحة المجهر وثقب دائري بحجم 8 ملم، وحشية مطاطية مع السطح الداخلي للأعلى، لملامسة التعليق البكتيري.
ركز على اتجاه طعم النسيج أثناء وضعه في الحامل. تأكد من أن السطح الداخلي للنسيج مكشوف بالفعل لمجرى الدم مواجها للأعلى ليصل إلى وسط التجربة الخاص بك.
بعد ذلك، أدخل الحامل مع النسيج في لوح الحشية المدمج في الإطار المعدني السفلي للغرفة.
ثبت الإطار المعدني العلوي مع ورقة الحشية المقابلة في أسفل الحجرة باستخدام حامل المناديل الذي تم إدخاله سابقا. ثم قم بتركيب الحجرة بالكامل بثمانية براغي وصواميل براغي. تأكد من أن ارتفاع الحجرة دائما متساوي عبر الطعوم باستخدام مسطرة أو كاليبر.
بعد ذلك، قم بتوصيل غرفة التدفق بمضخة بيريستالية. ثم أوصل خزان السائل بسعة 400 ملليلتر مع الأنابيب. قم بحقن 100 ملليلتر من عشرة إلى سبع وحدات تكوين مستعمرة معلمة بالفلورية في محلول ملحي مخزن بالفوسفات مع إجهاد هائل يبلغ ثلاثة داينات لكل سنتيمتر مربع ومعدل تدفق متوافق يبلغ أربعة ملليتر في الدقيقة لمدة ساعة باستخدام مضخة التبريستاليك وخزان البكتيريا. أعد تدوير تعليق البكتيريا بسعة 100 ملليلتر باستمرار باستخدام نفس خزان التجميع.