JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:15 د • March 31st, 2026
ابدأ بشتلات الذرة التي تنمو تحت ظروف محكمة لتكون المضيف.
بعد ذلك، خذ Agrobacterium tumefaciens، وهي بكتيريا ممرضة للنباتات.
تحمل البكتيريا الهندسية تركيب T-DNA يشفر جينوم فيروسي مؤتلف. يحتوي هذا الجينوم على جزء جيني مدرج مصمم لإسكات جين الذرة المستهدف.
حقن البكتيريا فوق العقدة الكوليوبتيلارية، وهي أدنى عقدة في النبات، حتى يملأ التعليق الكوليوبتايل، مما يضمن توصيلها إلى الأنسجة الداخلية.
في موقع الحقن، تنقل البكتيريا الحمض النووي التوري الحامل للجينوم الفيروسي إلى خلايا الذرة، حيث يتم نسخه إلى حمض نووي فيروسي ينتقل إلى السيتوبلازم.
يقوم الحمض النووي الريبي بتكاثر وتحفيز إنتاج البروتين الفيروسي ليصبح مكونا جزيئات فيروسية جديدة تنتشر بشكل نظامي لتثبيت العدوى.
يقوم الحمض النووي الريبي الفيروسي الحامل لجزء الجين المطلوب بتنشيط آلية تداخل الحمض النووي الريبي في النبات، مما يؤدي إلى تدهور الحمض النووي المغناطيسي المخصص للذرة وسكت الجين المستهدف.
ينتج عن ذلك تغيرات ظاهرية في الأنماط الظاهرية التي ينظمها الجين المستهدف مع نمو النباتات المصابة، مثل تكوين آفات نخرية، مما يؤكد نجاح إسكات الجينات.
استخدم شتلات الذرة التي تبلغ من العمر 4 إلى 7 أيام لحقن البكتيريوم. قم بتجميع الحقنة والإبرة. حقن التعليق البكتيري بلطف على ارتفاع 2-3 مليمترات فوق العقدة الكوليوبتيلولار حتى يملأ الكوليوبتايل، أو يصبح مرئيا في الدوامة، حسب مرحلة نمو النبات.
حقن جميع الشتلات وغير الحقنة والإبر لحقن كل تركيب. تأكيد العدوى الظاهرية من خلال ملاحظة الآفات الناتجة عن إسكات جينات الضابطة، أو مثل الآفة 22، أو فيتوين ديساتوراز على الأوراق.