اختبار في المختبر لدراسة التفاعلات الميكروبية في الزراعة المشتركة

ابدأ بألواح الاختبار الحيوي، واحدة مستعمرة مسبقا على الجانب الأيسر من الأجار المغذي باستخدام كورينباكتيريوم بروبينكوم ، والأخرى تحتوي على أجار مغذي فقط.

بعد ذلك، خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على تعليق المضربات العنقودية الممرضة.

اخفض ختم اللقاح في الآبار، بحيث تغمر أطرافها في ثقافة المكورات العنقودية (Staphylococcus ).

لف الختم، ثم ارفعه وتأكد من أن كل طرف يحمل قطرة موحدة لضمان التطعيم المتسق.

محاذاة الطابع مع الجانب الأيمن من لوحة التحليل الحيوي، متجنبا ملامسة المستعمرات الموجودة.

أزل الختم، تاركا بقع لقاح المكورات العنقودية على الأجار.

كرر الختم على طبق الأجار وحده لتوليد زراعة أحادية. حضن الألواح مقلوبة.

في الزراعة المشتركة، تفرز C. propinquum جزيئات سيدروفور، وهي جزيئات صغيرة تستخرج الحديد من الأجار، مما يثبط نمو المكورات العنقودية (staphylococcus ).

بعد الحضانة، قارن نمو المكورات العنقودية في الزراعة المشتركة والزراعة الأحادية.

يشير التثبيط الكبير في الزراعة المشتركة إلى تفاعل بين النوعين.

بعد حضانة صفيحة الاختبار الحيوي لمدة ستة أيام، جهز زراعات ليلية للكائن المستهدف كما هو موضح سابقا. جهز الطبق المستهدف بملء كل بئر من لوح فارغ مكون من 12 بئر ب 1.8 ملليلتر من BHI و200 ميكرولتر من الزراعة المستهدفة طوال الليل. ضع ختم تلقيح معقم في لوحة الهدف.

قم بتدوير الثقافات حول الآبار برفق، مع التأكد من أنها لا تلوث الآبار المجاورة. ارفع ختم الطعم، وتأكد من وجود قطرة من الزراعة المستهدفة المخففة على كل طرف ختم. ضع ختم التطعيم على لوحة اختبار حيوي غير ملقح، وهز الختم بلطف حتى تتلقى قطرة الزراعة كل بئر.

بمجرد إزالة الختم، يجب أن تكون قطرة من الزراعة مرئية في الآبار. إذا لم يتم تطعيم أي آبار بختم اللقاح، ضع 3 ميكرولتر من الزراعة المخففة طوال الليل على الآبار باستخدام الماصة. ثم، قم بتطعيم ألواح الاختبار الحيوي كما هو موضح سابقا، ولكن محاذاة أطراف الطابع مع الجانب الأيمن من صفيحة ال 12 بئرا، لضمان عدم ملامسة الختم مع مستعمرة البكتيريا الموجودة. أزل الختم بعناية وأعاده إلى اللوحة المستهدفة.

إذا كان الأجار قد تصلب في الآبار بشكل غير متساو، اهز الطابع بلطف ذهابا وإيابا، لكن كن حذرا من تحريك الطابع إلى نمو الكائن المختبر.

كرر عملية التطعيم لكل لوح اختبار حيوي حتى يتم تطعيم جميع الصفائح، ثم حضانة الألواح مقلوبة عند درجة الحرارة المناسبة لمدة سبعة أيام.

بعد الزراعة المشتركة بين الاختبار والكائن المستهدف لمدة أسبوع، قم بتقييم التفاعلات بناء على التقييم البصري. قم بتقييم الآبار التي تحتوي على نمو الكائن المستهدف الذي يظهر نموا غير مميز عن الزراعة الأحادية كصفر. قم بتسجيل الآبار التي لديها نمو منخفض كواحد، وعدم النمو كاثنين.