تقييم استعمار جذور شتلات الطماطم بواسطة بكتيريا ممرضة باستخدام عدد الخلايا القابل للحياة

خذ حاويات تحتوي على شتلات طماطم مزروعة في رمل معقم.

يتم تلقيح جذور الشتلات إما بنوع بري منتج للسليلوز أو بسلالة طفرة تفتقر إلى السليلوز من بكتيريا ممرضة للنباتات.

قم بإزالة مادة الختم من وعاء واحد، وقلبها على ورق معقم، ثم اضغط على أسطوانة الرمل التي تحتوي على النبات.

اقسم أسطوانة الرمل طوليا لتكشف الجذر.

ثم اغمس الجذر في طبقة معقمة وهز الجذر لإزاحة البكتيريا المتشابكة بشكل غير محكم.

كرر العملية للجذر الآخر.

انقل الجذور المغسولة إلى طبقة جديدة من المخزون. قم بسونيكها لإطلاق البكتيريا الملتصقة بإحكام.

استخدم هذه المعلقات الصوتية لتحضير التخفيف المتسلسل، ووضعها على الأجار، وحضنها للسماح للبكتيريا الحية بتكوين مستعمرات.

تعكس الأعداد الأعلى القابلة للحياة في السلالة البرية، مقارنة بالطفرة التي تفتقر إلى السليلوز، الدور الحاسم لألياف السليلوز في تعزيز التصاق البكتيريا بسطح الجذر.

لتحديد عدد البكتيريا الحية التي يتم العثور عليها في النباتات المزروعة في الرمل، ابدأ بإزالة المادة الختمة من أعلى وأسفل الحاوية.

ضع الحاوية فوق قطعة من الورق المعقم واضرب الحاوية بلطف على السطح لتخفيف الرمل قبل رفع الرمل برفق مع النبات من الحاوية.

عندما تكون أسطوانة الرمل والنبتة حرا على الورق، اقسم الرمل إلى المنتصف لكشف جذر النبات. إذا رغبت، خذ عينات من الرمل بالقرب من حافة الحاوية وكذلك بالقرب من الجذر. قد يكون هذا مفيدا لتحديد انتشار وتراكم ونمو البكتيريا.

ارفع الجذر وأزل الرمل والبكتيريا الملتصقة بشكل فضفاض عن طريق غمس الجذر في كمية محسوبة من الماء أو الطبقة الواقية ورزها بلطف. تحديد العدد السليم للخلايا للبكتيريا في التعليق الناتج عن طريق طلاءها على وسط مناسب مثل لوريا آجار. يمثل هذا عدد البكتيريا المرتبطة بشكل فضفاض بالجذر. وأخيرا، قم بإزالة البكتيريا المقيدة بإحكام عن طريق السونيكيشن وتحديد أعدادها.