التصوير الفلوري لاستعمار البكتيريا في أنسجة كلى الفئران

ابدأ بكلية فأر مصابة ببكتيريا موجبة الجرام الهندسية تستعمر الأنسجة وتشكل آفات.

جميع الخلايا البكتيرية تعبر عن فلورة حمراء، بينما تسمح الظروف الخاصة بالمضيف الخاصة بالآفات من التعبير عن البروتين الفلوري الأخضر في خلايا محددة.

عالج الكلى بمادة تثبيت وحضن في الظلام للحفاظ على بنية الأنسجة واختراق جزئي لأغشية الخلايا.

قم بإدخال العضو في وسط مناسب، ثم تجميده، وقطعه إلى شرائح رقيقة من الأنسجة.

ضع الشريحة على شريحة زجاجية مشحونة للالتصاق.

صبغ النسيج بصبغة نووية.

تخترق الصبغة خلايا المضيف والبكتيريا وترتبط بالحمض النووي.

ضع غطاء فوق النسيج وراقب الشريحة تحت مجهر فلوري باستخدام قنوات تصوير محددة.

التلوين النووي يحدد حمض المضيف والحمض النووي البكتيري.

جميع البكتيريا في النسيج تعبر عن الفلورة الحمراء، بينما يشير التعبير الأخضر عن الفلورة إلى موقع تفاعل المضيف والممرض.

عند النقطة التجريبية المناسبة، يتم جمع الكلى والقلب والكبد والرئتين والطحال في أنابيب بولي بروبيلين سعة 15 ملليلتر تحتوي على 10٪ فورمالين مخزن لمدة 24 إلى 48 ساعة في الظلام بدرجة حرارة الغرفة مع هز أو تدوير لطيف.

في نهاية التثبيت، قم بإدخال الأعضاء في وسط تجميد أنسجي شفاف للتخزين عند ناقص 80 درجة مئوية. استخدم كريوستات للحصول على أقسام نسيج بسماكة 10 ميكرومتر وجفف الأقسام على شرائح زجاجية مشحونة ومنظفة مسبقا لمدة 20 دقيقة في الظلام قبل تطب